第十三章高效液相色谱法精选.ppt

* 第五节　高效液相色谱仪 （二）荧光检测器(fluorescence detector；FD) 特点： 选择性好，专属型检测器 灵敏度比紫外检测器高（检测限10-10 g/ml） * 第五节　高效液相色谱仪 （三）示差折光检测器 利用样品池和参比池之间折光率的差别来对组分进行检测，测得折光率差值与样品组分浓度成正比。 每种物质的折射率不同，原则上讲都可以用示差折光检测器来检测。 其主要缺点是折光率受温度影响较大，且检测灵敏度较低，不能用于梯度洗脱。 * 第五节　高效液相色谱仪 （四）蒸发光散射检测器 样品组分在蒸发室内形成气溶胶，而后进入检测室。 用强光或激光照射气溶胶而产生散射，测定散射光强而获得组分的浓度信号。 * 第五节　高效液相色谱仪 （五）安培检测器 利用组分在氧化还原过程中产生的电流或电压变化来对样品进行检测。 只适于测定具有氧化还原活性的物质，测定的灵敏度较高，检测限可达10-9g/ml。 * 第五节　高效液相色谱仪 五、数据记录及处理系统 微机采集和分析色谱数据：给出峰宽、峰高、峰面积、对称因子、分离度等色谱参数。 复杂的试样，需要“色谱专家系统”。 * 第五节　高效液相色谱仪 六、高效液相色谱仪的主要性能指标 流量精度 噪音 漂移 检测限 定性与定量重复性 * 课堂活动 试说出高效液相色谱仪的基本组成及工作流程。 第五节　高效液相色谱仪 * 点滴积累 高效液相色谱仪主要包括输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据记录及处理系统。 高效液相色谱使用的高压泵按输液性能可分为恒压泵和恒流泵，按机械结构又分为液压隔膜泵、气动放大泵、螺旋注射泵、往复柱塞泵四种。 常用的高效液相色谱检测器有紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、安培检测器等。 第五节　高效液相色谱仪 * 第六节 定性与定量分析方法 一、定性分析方法 HPLC的定性分析方法与GC相似，有色谱鉴定法、化学鉴定法、多谱联用鉴定法。利用纯物质和样品的保留时间或相对保留时间的相互对照进行定性判断。 第六节 定性与定量分析方法 * 第六节定性与定量分析方法 二、定量分析方法 HPLC的定量方法与GC相同，常用外标法、内标法和内加法，而归一化法应用较少。在进行样品测定前要做系统适用性试验，即用规定的方法对仪器进行试验和调整，检查仪器系统是否符合药品标准的规定。《中华人民共和国药典》（2010年版）规定的色谱系统适用性试验包括：理论塔板数、分离度、拖尾因子、重复性。 第六节 定性与定量分析方法 * 第六节 定性与定量分析方法 外标法是以对照品的量对比求算试样含量的方法。只要待测组分出峰、无干扰、保留时间适宜即可用外标法进行定量分析。 内标法是以待测组分和内标物的峰高比或峰面积比求算试样含量的方法。使用内标法可以抵消仪器稳定性差、进样量不够准确等原因带来的定量分析误差。内标法可以分为校正曲线法、内标一点法（内标对比法）、内标二点法及校正因子法。 内加法是将待测物i的纯品加至待测样品中，测定增加纯品后的溶液比原样品溶液中i组分的峰面积增量，来求算i组分含量的的定量分析方法。 二、定量分析方法 * 第六节定性与定量分析方法 HPLC的定性分析方法与GC相似, HPLC的定量方法与GC相同。 HPLC的定量方法常用外标法、内标法和内加法，而归一化法应用较少。 点滴积累 * 第七节 毛细管电泳分离分析法简介 第七节 毛细管电泳分离分析法简介 一、毛细管电泳分离的基本原理 电泳迁移:不同分子所带电荷性质、多少不同，形状、大小各异。一定电解质及PH的缓冲液或其它溶液内，受电场作用，样本中各组分按一定速度迁移，从而形成电泳。 电泳迁移速度(v)可用下式表示：v=uE 电渗迁移 电渗迁移指在电场作用下溶液相对于带电管壁移动的现象。特殊结构的熔合硅毛细管管壁通常在水溶液中带负电荷，在电压作用下溶液整体向负极移动，形成电渗流。 * 第七节 毛细管电泳分离分析法简介 分离分析类型 毛细管区带电泳（capillary zone electrophoresis，CZE） 毛细管胶速电动色谱（miceller electrokineticcapillary chromatography，MECC ） 毛细管等速电泳（capillarychromatography，CITP） 此外，还有毛细管凝胶电泳（CGE）、毛细管电色谱（CEC）及非水毛细管电泳（CNACE）。 * 第七节 毛细管电泳分离分析法简介 二、毛细管电泳仪 图13-5 毛细管电