第5章 PCR技术的基本原理及应用(研究生课程).ppt

8、DNA多态性 DNA多态（DNA Polymorphism）： DNA区域中等位基因(或片段)存在两种或两种以上形式,对基因没有影响,称为DNA 多态。 群体中每个个体（体细胞）的两套单倍体DNA是不完全相同的，一般每100~500bp就有一个是不相同的，它们多位于内含子序列中，表型并没有改变，这种表现称为DNA多态。除一卵双生子外，没有两个个体的基因组DNA是完全相同的。 常用做遗传分析中的标记---遗传标记 DNA分析中常用的多态性标记有3类 1）RFLP：称限制性片段长度多态性，为第一代多态性标记； 2）重复序列多态性：短串联重复序列（STR），为第二代多态性标记； 3）单碱基多态性（SNP）：DNA单个核苷酸的差别，为第三代多态性标记。 一、序列多态（或点多态） 限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism ，RFLP ）。 由于碱基的变异可能导致限制酶切点的消失或新的酶切点出现，从而引起不同个体的DNA在用同一限制酶切割时，产生DNA片段长度的差异。这种由于酶切位点变化导致的DNA片段长度的差异称为RFLP。 非常有用的遗传标记，所含的信息量有限。 Allele I Allele II 12Kb 8Kb 4Kb probe 12Kb 8Kb RFLP—Southern blot检测结果 Allele II 产生了新的酶切点 镰状红细胞贫血HBS-Beta株蛋白基因突变 血红蛋白病可以由血红蛋白结构或合成异常所致的遗传性疾病。前者称为异常血红蛋白病，后者称为地中海贫血。 针对异常血红蛋白病如镰刀状红细胞贫血症是由于?珠蛋白基因的第6位密码子GAG突变成GTG，导致蛋白结构异常。对此遗传病的基因诊断可采用PCR-限制性内切酶分析技术。 × 5′ 3′ 正常基因 5′ 3′ 突变基因 1.15kb 1.35kb 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析 PCR-RE分析 MstII CCTGAGG-CCTGTGG + ﹣ 0.2kb 1.15kb 1.35kb 正常人 突变携带着 患者 镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析  二、序列长度多态性（或数目变异串联重  复，variable number tendom repeats, VNTR） 重复序列以各自的核心序列（重复单元），首尾相连多次重复，称为串联重复序列。散在地分布于染色体上，以插入/缺失方式形成多态。如图： VNTR两侧的酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。 大 小 VNTR 酶切，电泳后的检测结果 PCR-VNTR检测  通常，重复单位6~28bp长，称为小卫星DNA。 重复单位2~6bp长，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）? 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * * * * * * * * *  --------------------------- primer --------------------------- ↓ 32P-dNTP掺入 PCR扩增 产物 ↓ 变性 ↓ 单链DNA ↓ 中性聚丙烯酰胺凝胶电泳 ? ↓ 1 2 3 4 5 自显影 ↓