[13体外受精与核移植动物.pptVIP

（3）电泳分离法 利用精子表面电荷差异采用电泳进行分离。精子 带负电荷，Y精子负电荷略小于X精子，因此在中 性缓冲液中，X精子向阳极移动的速度较快。 优点是操作方便，缺点是分离效率不高。 （2）免疫学分离法 Y精子上存在雄性特异性组织相容性抗原（H-Y 抗原），利用H-Y抗体检测精子质膜上是否存在 HY抗原，以此分离X精子（H-Y抗原阴性）和Y 精子（H-Y抗原阳性）。 主要有免疫亲和柱层析法和免疫磁珠法。目前这 个方法仅限于小规模实验研究，准确性较低。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. （4）流式细胞仪分离法 根据X、Y精子上DNA含量的微小差别，通过流 式细胞仪(Flowcytometer)进行分离。 首先将精子稀释并与荧光染料Hoechst 33342混 合，这种染料可以定量地与DNA结合。精子通过 检索仪时被激光束激发，由于X精子比Y精子含较 多的DNA，X精子放射出较强的荧光信号。 放射出的信号通过计算机系统分辨X精子和Y精子。 借助两块各自带正电或负电的偏斜板，把X或Y精 子分别引导到2个收集管中。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 13-4 核移植动物 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 一 定义 细胞核移植（Cell nuclear transfer）是利用显微操作 技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核 成熟卵细胞内的技术。 细胞核移植动物：是用特定发育阶段的核供体及相应的核 受体（去核的卵子）体外构建重组胚，通过胚胎移植达到 受体，发育出生的动物。 理论基础：动物细胞核具有发育成个体的全能性，因此克 隆动物可以通过细胞核移植实现。 但是，细胞核移植所得到的动物为核质杂种。 克隆动物一般指采用核移植、胚胎移植技术得到 的动物。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 二 核移植动物培育技术流程 1-核供体细胞的获得与取核 2-受体细胞的去核 3-细胞核移植 4-重组胚的激活、培养和移植 5-核移植后代的鉴定 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 1 核供体细胞获得与取核 供核细胞可以是动物原代细胞或传代细胞。分离 制备单个动物细胞，体外培养得到正常二倍体体 细胞系，然后进行1～5 天的缺血饥饿培养，诱 使细胞处于“静止”状态（一般进入G0 期）。 采用细胞松弛素B（Cytochalasin B）诱发细胞排 核或者显微操作取核等方法得到细胞核。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 2 受体细胞去核 （1）盲吸去核法：用微细玻璃管吸除处于MII分裂中期 的卵细胞染色体及周围的部分细胞质。 用荧光染料Hoechst33342对卵细胞DNA进 行染色，在紫外观察下去核可提高去核成功率。 （2）功能性去核法：使用Hoechst33342与卵细胞 DNA结合后，用紫外线或激光定点照射使核功能丧失。 （3）化学诱导去核法：使用脱羰秋水仙素处理卵细胞 ，迫使核染色质全部进入第二极体细胞。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile . Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 3 细胞核移植 细胞核移植可以采用胞质内注射和透明带下注射 方法。 前者是用微吸管吸取供体核后，直接注射进卵子 细胞质。 后者是把细胞核注射进透明带和卵细胞间的卵周 隙中。 Evaluation only. Creat