基因工程的操作程序1教案分析.ppt

1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 （2）将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 错题重做（课时二第6题） 利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是 A棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 月考再现 （2）用含重组质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，采用__________ 技术检测转基因马铃薯的染色体DNA上是否导入了目的基因，同时还要采用__________ 技术检测目的基因是否在转基因马铃薯细胞中表达。 2．下图表示一项重要的生物技术，对图中物质a、b、c、d的描述，正确的是 A．a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 B．要获得相同的黏性末端，可以用不同种b切割a和d C．c连接双链间的A和T，使黏性末端处碱基互补配对 D．若要获得原核生物的d，则一般采用人工合成方法 B 3.(2010年高考天津理综)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。 (1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含______________的培养基上进行。 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ 氨苄青霉素 3.(2010年高考天津理综)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。 (2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是________(填字母代号)。 A．启动子　　B．tetR　　C．复制原点　　D．ampR A 注意： 1、PCR技术扩增目的基因与DNA复制的比较（名师7页） 2、特别提醒7页 3、规律方法：7页 二、基因表达载体的构建 ——基因工程的核心 1、目的： 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 2.基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们各自的作用是什么? 目的基因： 外源DNA分子的有效片段 启动子 位置： 功能： 基因的首端 是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 终止子 位置： 功能： 基因的尾端 终止转录 标记基因： 鉴别受体细胞中是否含有目的基因 目的基因： 外源DNA分子的有效片段 启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 （1）.用一定的_________切割质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 （2）.用_____________切断目的基因，使其产生_____ （3）.将切下的目的基因片段插入质粒的______处，再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 切口 DNA连接酶 相同的黏性末端 3.构建过程: 取质粒 取DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 ？ ？ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 质粒片段 目的基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……G　　AATTC…… ……CTT