(优)3-zhou目的蛋白质表达、纯化、检测.pptVIP

实验目的 重点掌握表达载体构建的原理及方法 掌握目的基因原核诱导表达的原理及方法 了解目的蛋白质 “标签”纯化的基本原理和方法 掌握PAGE变性凝胶电泳的原理及方法 掌握考马斯亮蓝染色的方法 目的蛋白质的诱导表达 目的蛋白质的纯化 目的蛋白质的检测 蛋白质的表达：将克隆基因插入合适载体后导入宿主细胞表达大量蛋白质的方法。 体内很难分析单个蛋白质的作用 进行大量表达和纯化是为了在体外进行研究 应用于蛋白纯化、定位及功能分析等方面 原核细胞表达系统菌株 菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。 堪称经典的BL21系列就是lon和ompT蛋白酶缺陷型，也是我们非常熟悉的表达菌株。 大名鼎鼎的BL21(DE3)融源菌则是添加T7聚合酶基因，为T7表达系统而设计。 原核表达质粒的构建 目的基因 表达载体 目的基因 / DNA / PCR / 酶切 / Primer 例： p38中抑制多肽16肽序列 GGA AGA ACA TTG TTT CCT GGT ACA GAC CAT ATT GAT CAG TTG AAG CTC F 5’-ACG GAT CC TA GGA AGA ACA TTG TTT CCT GGT-3’ R 5’-ACG GAT CC TTA GAG CTT CAA CT