沙枣多酚响应面分析.docVIP

超声波辅助提取沙枣多酚的工艺优化研究 1 材料、药品与仪器 沙枣于2008-2009年9月连续两年在甘肃古浪县腾格里沙漠随机抽取沙枣树50棵，用“几何法”采样后，缩小至1000g，在实验室经“四分法”采样到250 g，取核，粉碎过40目筛。 UV-9000紫外分光光度计（北京瑞丽分析仪器公司）、743型Rancimat仪（瑞士万通）、FD-1-55冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）、JY99-2D型超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。DPPH·(二苯代苦味酰基自由基,SIGMA-ALDRICH.Inc)、Tannic acid（单宁酸标准品，SIGMA-ALDRICH.Inc）、Trolox (维生素E水溶性衍生物，SIGMA-ALDRICH,Inc)，Vc（维生素C）、磷钼酸、磷酸、无水乙醇、无水碳酸钠、钨酸钠等均为分析纯，BHT、TBHQ为食品级，NKA-9大孔吸附树脂购于南开大学化工厂。 2 试验方法 2.1 Folin-Dennis试剂制备[4] 在1000mL三角瓶中加入750mL蒸馏水，100g钨酸钠，20g磷钼酸，50mL磷酸后，在沸水浴中回流2h后，冷却至室温，并稀释至1000mL，即得Folin-Dennis试剂试剂。 2.2标准曲线的制作[5-7] 5mg单宁酸标准品溶于80%乙醇中，用水定容至10mL，即为0.5mg/mL的单宁酸标准溶液，分别移取0，20，40，60，80，100，120μL的单宁酸标准品于10mL容量瓶中，定容，从上面不同浓度的标准溶液中分别移取0.1mL放入10 mL容量瓶中，加入2mL蒸馏水，2.5mLFolin-Dennis试剂，用力摇匀，保持3min，加入5mL饱和Na2CO3溶液，用水定容至10mL。充分混匀，室温下保持1h，于760nm下测吸光值。每个浓度做 3个平行试验，取平均值，绘制标准曲线，得到吸光度值Y 与单宁酸标准溶液浓度X (mg／mL )之间的回归方程为：Y=0.4566X+0.081，R2=0.9999 2.3沙枣多酚含量的测定 采用超声波辅助溶剂浸提法。称取2.0000g沙枣样品，加入一定的乙醇溶液在一定超声功率下超声一定时间后在3500r/min 离心分离5min，然后定容至50mL。取样品溶液50μL到25mL容量瓶中，按照上述标准曲线的制作方法，测定其吸光度，计算样品中多酚含量。多酚含量（%）=样品中多酚质量（g）/样品质量（g）×100 2.4 响应曲面法试验设计 采用统计分析软件Design Expert 7.1.3软件进行4因素3水平的响应面分析试验。 2.6 沙枣多酚制备 在最优工艺条件下提取沙枣多酚后，浸提液离心除渣，上清液浓缩用NKA-9(树脂已经过筛选)大孔吸附树脂纯化，以去离子水洗涤除去水溶性杂质，再以50%乙醇洗脱得黄色乙醇洗脱液，减压蒸馏后冷冻干燥，得沙枣多酚。 3.1 单因素实验 3.1.1料液比对沙枣多酚含量的影响 乙醇浓度60%，超声10min，超声功率200W条件下做料液比对沙枣多酚含量的影响。由图1a可知, 随料液比的增大，多酚含量逐渐增大，当料液比为1:12时多酚含量达最高，说明此时多酚已提取完全，因此，取最佳料液比为1:12。 3.1.2超声时间对沙枣多酚含量的影响 乙醇浓度60%，超声功率为200W，料液比为1:12条件下研究超声时间对沙枣多酚含量的影响。由图1b可知，当超声时间为10min时，多酚含量最大，当超声时间大于10min时，随时间的增大多酚含量降低，另外，时间越长，耗能越大，所以取最佳超声时间为10min。 3.1.3乙醇浓度对沙枣多酚含量的影响 超声功率为200W，料液比为1:12，超声时间为10min条件下研究乙醇浓度对沙枣多酚含量的影响。 由图1c可知：多酚含量随乙醇浓度的增加而升高，当乙醇浓度在50%时，有较高的含量，当乙醇浓度大于50%，多酚含量降低。因为较高乙醇浓度有利于提高乙醇提取物含量，但高浓度乙醇使其他醇溶性杂质的溶出增多，多酚成分溶出减少，因此，最佳乙醇浓度取50%。 3.1.4超声功率对沙枣多酚含量的影响 以料液比1:12，超声时间为10min，乙醇浓度50%条件下做功率对沙枣多酚的影响。由图1d可知：随超声功率增大，多酚含量逐渐增大，当功率达280w以上时，超声功率增大多酚含量降低，因此，最佳超声功率为280w。 图1 沙枣多酚提取单因素试验结果 Fig.1 Results of single factor experiments for Elaeagnus Angustifolia L . polyphenol 3.2 响应面优化试验 3.2.1 响应面实验设计及结果 根据单因素试验结果，选择超声功率、超声时间、料液比和乙醇浓度作响应