实验3-酪蛋白的制备.PPTVIP

酪蛋白的制备 几种主要沉淀方法比较 原理 等电点沉淀（选择性沉淀） 利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。 注意： 调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。 实验课学习的重点 1、基本的操作 2、每一步的实验现象 3、每一步操作的目的 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预 热）用滴管加入HAC缓冲液约2ml（pH 4.8） 离心，10000转/分，5分钟 1、布朗运动加速蛋白分子的碰撞 2、等电点附近蛋白质的溶解度最低 用4ml蒸馏水洗涤离心，10000转/分，5分钟 除去沉淀中的可溶部分 95%乙醇洗涤离心，10000转/分，5分钟 除去沉淀中的脂类物质 乙醚2ml洗涤离心，10000转/分，5分钟 脱水 0.1N NaOH 2ml溶解加水至10ml 酪蛋白是酸性蛋白质，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定 加分问题 1、 请问用缓冲液、乙醚、乙醇洗涤沉淀的目的是什么？ 2、请问本次实验加液体时使用什么仪器？为什么？ 操作的改动 1、离心时统一变为10,000rpm×5min 2、统一使用5ml的EP管 * * 牛乳2ml 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预热）用滴管加入HAC缓冲液约2ml（pH4.8）离心，10000转/分，5分钟 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 用4ml