实验3-双缩脲法测定蛋白质含量.pptVIP

实验 双缩脲法测定蛋白质浓度 一、实验目的 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法 二、原理 一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析 1．原理 2．主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm， 核酸的最大吸收波长为260nm。 （二）利用吸收光谱对物质进行定量分析 2．常用方法 （1）标准曲线法 　　　　　　　　　　　　　　　　　 标准曲线与样品的测定条件必须一致。 （2）标准管法 CX/AX=CS/AS，已知CS，测定AS、AX，可求得CX。 （3）摩尔吸光系数法 C=A/K（K为L=1cm，C为1 mol/L时的吸光系数，也称为摩尔吸光系数。 实验原理 蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2＋形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关。 在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540～560nm下比色，可以通过标准曲线法或对照法求出未知样品的蛋白质浓度。 实验操作 课后练习 1、描述五种蛋白质浓度测定方法的优缺 点、灵敏度和原理。 2、双