实验8-肝脏DNA的粗提取.pptVIP

实 验 八 肝脏DNA的粗提取 实验目的 掌握DNA提取的基本原理 熟悉DNA提取的操作步骤 掌握离心技术 一般过程 破碎细胞 提取核蛋白 DNA核蛋白和RNA核蛋白分离 蛋白和核酸分离 原则 低温：抑制DNA酶的活性 操作柔和：防止DNA断链 DNA分离纯化的原理 DNA或DNP在0.14MNaCl盐溶液中溶解度很低，而RNA则溶于0.14MNaCl盐溶液，利用这一性质可将生物组织中的DNA与RNA分开 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取脱氧核糖核蛋白复合物-DNP后，必须将其中蛋白去除 其中蛋白质部分可用SDS使之变性除去（同时破坏核酸分解酶）。 进一步纯化则利用氯仿-异戊醇震荡除蛋白，震荡时，蛋白质变性，形成凝胶，并与DNA分开，DNA则留在水层中。 利用DNA不溶于乙醇，因而用乙醇将DNA 从溶液中沉淀出来。 实验步骤 1、取新鲜猪肝4g，用0.14mol/L NaCl — 0.15mol/LEDTA溶液洗去血液，剪碎。加入10ml 0.14mol/L NaCl — 0.15mol/L EDTA溶液，置匀浆器中研磨。（初步破碎细胞）。（已做） 2、取一支10mlEP管，装入糊状物（基本装满），离心5min（10000rpm），弃去上清液 沉淀用0.14mol/l NaCl-0.15mol/l EDTA溶液洗2次。每次加入溶液后用吸管吹打均匀