实验5-双缩脲法测定蛋白质含量.pptVIP

实验 双缩脲法测定蛋白质浓度 一、实验目的 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习蛋白质含量测定的原理和方法 3. 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法 二、原理 一、分光光度法的基本原理及方法 （一）利用吸收光谱对物质进行定性分析 1．原理 2．主要方法： （1）比较吸收光谱曲线 （2）比较最大吸收波长 蛋白质的最大吸收波长为280nm， 核酸的最大吸收波长为260nm。 （3）比较吸光度的比值 纯DNA （二）利用吸收光谱对物质进行定量分析 1．原理 Beer-Lambert（比尔）定律： T=I/I0 A=lg1/T=lgI0/I A=KCL 其中：T为透光率；A为吸光率；I0为入射光强度；I为透射光强度； K为吸收系数；C为溶液浓度；L为溶液光程的厚度 2．常用方法 （1）标准曲线法 　　　　　　　　　　　　　　　　　 标准曲线与样品的测定条件必须一致。 （2）标准管法 CX/AX=CS/AS，已知CS，测定AS、AX，可求得CX。 （3）摩尔吸光系数法 C=A/?（?为L=1cm，C为1 mol/L时的吸光系数，也称为摩尔吸光系数。 四、分光光度计的使用 1．722型分光光度计的外形 2.仪器操作键介绍 “方式设定”键（MODE）：用于设置测试方式 “