实验6-电泳技术.pptVIP

三、PAGE原理 PAGE根据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统两大类，前者电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；后者电泳体系中由于 缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷 效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。 不连续体系由电极缓冲液、样品胶、浓缩胶及分离胶组成，两层玻璃板中排列顺序依次为上层样品胶、中间浓缩胶、下层分离胶。 样品胶的T=3%,c=2%，其中含有一定量的样品及pH6.7的Tris-HCl缓冲液，其作用是防止对流，促使样品浓缩以免被电极缓冲溶稀释。目前，一般不用样品胶，直接在样品液中加入等体积40%蔗糖，同样具有防止对流及样品被稀释的作用。浓缩胶是样品胶的延续，凝胶浓度及pH值与样品胶完全相同，其作用是使样品进入分离胶前，被浓缩成窄的区带，从而提高分离效果。 分离胶的T=7.0%-7.5%,c=2.5%，缓冲液为pH8.9的 Tris-HCl，大部分蛋白质在此pH条件下带负电荷。此胶主要起分子筛作用。 1.样品浓缩效应 (1)凝胶孔径的不连续性：上述3层凝胶中，样品胶及浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在 电场作用下，样品颗粒在大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻力大，移动速度减慢。因而在