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- 2017-01-08 发布于广东
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α-淀粉酶活力的测定一、实验目的 通过本实验,使学生掌握α-淀粉酶活力测定的基本原理、方法和操作技能。二、实验原理 α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1,4葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖,而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失,呈红棕色,其颜色消失的速度与酶活力有关,故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力三、实验试剂和仪器 (一)试剂 1. 原碘液 称取碘(I2)11g,碘化钾(KI)22g,用少量水使碘完全溶解,然后定容至500mL,贮于棕色瓶中。 2. 稀碘液 吸取原碘液2.00mL,加碘化钾20g,用水溶解并定容至500mL,贮于棕色瓶中。 3. 20g/L可溶性淀粉溶液 称取可溶性淀粉(以绝干计)2000g.精确至0.001g,用水调成浆状物.在搅动下缓缓倾入70mL沸水中。然后,以30mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯,洗液并入其中,加热至完全透明,冷却,定容至100mL。此溶液需要当天配制。 可溶性淀粉酶:4. 磷酸缓冲液(pH6.0) 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)45.23g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)8.07g,用水溶解并定容至1 000mL。配好后用pH计校正。四、实验步骤 1. 待测酶液的制备 称取酶粉l-2g,精确至0.0002g(或吸取液体酶100mL),先用少量的磷酸缓冲液溶解,并用玻璃搅拌棒捣研,
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