葡萄分子生物学研究进展.docVIP

果树分子生物学研究进展 ——DNA分子标记技术 在葡萄的分子生物学的研究与应用初探 摘要：DNA分子标记技术是现代分子生物学中最重要也是应用最广泛的技术之一，在葡萄分子生物学研究领域中也发挥着巨大作用。本文从分子标记在葡萄多个研究方面的应用出发，初步探讨了在葡萄分子生物学研究中应用较为广泛的几种DNA分子标记技术的原理以及在国内的研究与应用进展。 关键词：葡萄；分子标记；应用；研究进展 葡萄是一种具有悠久栽培历史的果树种类，其果实具有优良的食用口感，也有酿酒、榨汁等加工用途，所以广受人们喜爱，在世界各地都有广泛的栽培。在长期的进化过程中，葡萄形成了许多种群、品种群、变种和生态型，又加之葡萄基因组杂合度高，存在大量多态性，同时葡萄的形态特征和同工酶容易受发育阶段和环境的影响。以前所采用的形态解剖、生理生化等方法很难对葡萄的品种、杂种及亲缘关系进行准确的研究、分析和鉴定，因而给人们对其相关研究带来了较大的阻碍。 与传统的形态标记、细胞标记和生化标记相比，DNA 分子标记具有直接以DNA 形式表现、标记位点数量多、多态性高、表现为“中性”、检测迅速和操作简便等优势[1]，因而在葡萄品种鉴定、遗传多样性分析、遗传图谱构建、基因连锁标记筛选、分子辅助选择和基因克隆等方面得到了较广泛的应用。 一、种质鉴定和系谱分析 葡萄在全世界分布十分广泛，易发生芽变等突变，种类和品种众多，同物异名及同名异物的现象比较普遍，因此品种鉴别成为葡萄研究和生产实践的重要环节之一。传统方法受基因型与环境的互作影响，使这些鉴定方法受到了许多限制，导致传统的鉴别方法分辨率不高[2]。分子标记技术则提供了一种更为有效的品种鉴定方法。应用DNA 标记技术可以对近缘作物品种甚至芽变品种（系）进行分子鉴定。应用在种质鉴定中的分子标记主要有以下几种： 1. RAPD标记 1.1原理 RAPD标记是目前葡萄种质鉴定上应用最多的标记类型之一。RAPD全称为随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphism DNA)，RAPD技术是William和Welsh等人1990年同时提出的一种DNA分子标记技术。它是以基因组DNA为模板，以随机寡聚核昔酸序列为引物，通过PCR扩增，产生不连续的DNA产物来检测DNA片段多态性。此标记具有操作简单、不需设计专门引物、自动化程度高、费用低、快速高效、无放射性污染等优点。目前广泛用于种质资源及品种鉴定、系谱分析、目标性状快度定位、分子标记辅助育种和基因克隆等方面。但RAPD技术反应条件严格，稳定性差，多数位点为显性标记，不能区分杂合基因型和纯合基因型，因此，在操作过程中应尽量优化反应体系或将其转化成共显性标记(如SCAR标记)。 1.2研究应用 早在1998年，张立平、林伯年等人就利用RAPD分子标记方法分析了葡萄属33个种及品种材料，结果表明, RAPD能较好地用于种及品种的鉴定,供试33个材料可分为9类和1个特殊型。美洲葡萄类群聚为一个类型,起源于我国的东亚类群分属于8个类型,圆叶葡萄单独为一个类型[3]。 而在2011年，李玉玲，白实践等从已发表文章中选出96个适合于葡萄RAPD分析所用随机引物进行引物筛选，旨在对采自新疆维吾尔自治区葡萄瓜果开发研究中心的180份葡萄材料进行亲缘关系的分析。经PARD分析,筛选出的21个条带较多且清晰的引物，通过聚类分析，180份材料共分为7类[4]。 2012年，王玉娟、张彦等通过增加引物长度以及严格筛选 PCR 退火温度优化的RAPD技术体系，从35个长度为11个碱基的引物中筛选出6个条带清晰且多态性高的引物，进一步对72个葡萄品种进行PCR扩增获得了DNA指纹[5]。 2.SSR标记 2.1原理 近几年来，SSR标记在葡萄种质鉴定中的应用增多。简单重复序列(Simple Sequence Repeats) 是指以少数几个核昔酸序列(一般为2~4个)为单位形成串联重复的DNA序列。SSR呈共显性遗传；标记带型简单，条带一致明确;需DNA量少且要求质量不高;多态性非常丰富。可用于遗传图谱绘制、亲本鉴定、分子标记辅助育种等方面。 2.2研究应用 （图表来源：张君玉. 利用SSR和SRAP分子标记构建葡萄核心种质.） 二、目标性状基因的分子标记 筛选与目标性状基因相连锁分子标记是分子标记辅助育种、基因定位作图和目的基因克隆的前提和基础。目前，DNA分子标记因其稳定性和可靠性而成为标记目标性状基因的主要方法。 1. RAPD标记 RAPD标记的原理上文已经介绍过，下面主要讨论一下其在目标性状基因的分子标记中的应用研究。 2011年，郭磊,王晨等使用cDNA-RAPD技术,以藤稔葡萄正常成花花芽和摘心处理后成花花芽为材料,分析了摘心处理后与葡萄夏芽成花相关基因的差异表达。通过