基因工程及其应用54806.pptVIP

第2节 基因工程及其应用 设想： 如何让大肠杆菌合成人的胰岛素？ 一 基因工程的原理 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 （一）基因工程的概念 （二）基因操作的工具 基因的“剪刀”——限制性核酸内切酶 （限制酶） 基因的“针线”——DNA连接酶 基因的“运载工具”——运载体 1 基因的“剪刀” ——限制性核酸内切酶（限制酶） （二）基因操作的工具 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 限制酶 大肠杆菌的一种限制酶（EcoRI）能专门识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 2 基因的针线——DNA连接酶 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”(形成磷酸二酯键 )，这样一个重组的DNA分子就形成了。 几种酶的比较 逆转录， 基因工程 以RNA为模板合成DNA 逆转录酶 DNA复制 及转录 使碱基间氢键断裂形成单脱氧核苷酸链 解旋酶 转录 在核苷酸链上添加单个核苷酸 RNA聚合酶 DNA复制 在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸 DNA聚合酶 基因工程 切割某种特定的脱氧核苷酸序列 限制性核酸内切酶 连接两个DNA片段 DNA连接酶 参与生理过 程及应用 作 用 名 称 常用的运载体主要有两类： 1）细菌以及酵母菌细胞质的质粒 2）噬菌体或某些动植物病毒 3 运载体 质粒： 质粒是基因工程最常用的运载体。 绝大多数细菌质粒都是闭合环状DNA分子。有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。 （三）基因操作的基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 研究P103图6—6 基本步骤演示 ATGCCAGTACAGCGTACGATC GTACAGCGTA 基因诊断（DNA分子杂交技术） 制作基因探针 加热使待测基因变性 杂交 TACGGTCATGTCGCATGCTAG 放射性标记 32P、荧光分子 GTACAGCGTA 基 因 治 疗 1、概念 把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效手段。 1、受体细胞一般为体细胞而不是受精卵，基因治疗后只有一部分细胞含有正常基因。 2、基因治疗没有影响原有基因，所以细胞中两种基因同时存在。 注意：