仪器分析实验教案-化本11级.docVIP

实验 荧光分光光度法测定维生素B2的含量（4学时） 一、实验目的 1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。 2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。二、实验原理 维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其式为： 维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。 维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm。维生素B2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。 当实验条件一定时，荧光强度IF与荧光物质的浓度成线性关系： 这是荧光光谱法定量分析的理论依据。 (2)荧光分析法的特点: a.与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更高的灵敏度。 b.选择性好。荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。 c.所需试样量少、操作方法简便。 (3)荧光分析仪器 a.常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器和显示记录器五部分构成，如下图所示： b.荧光分析仪器与分光光度计比较主要差别有两点： (a)荧光分析仪器采用垂直测量方式，以消除透射光的影响； (b)荧光分析仪器有两个单色器，能够获得单色性较好的激发光并消除其它杂散光干扰。 c.荧光分光光度计工作原理：由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪，激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制，当测绘荧光发射光谱时，将激发光单色器的光栅，固定在最适当的激发光波长处，而让荧光单色器凸轮转动，将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上，所记录的光谱即发射光谱，简称荧光光谱。当测绘荧光激发光谱时，将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处，只让激发光单色口的凸轮转动，将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪，所记录的光谱即激发光谱。 当进行样品溶液的定量分析时，将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处，将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处，由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。三、实验仪器和试剂 主要仪器：荧光分光光度计；1cm石英皿；25mL容量瓶；1mL、5mL移液管 试剂：维生素B2标准溶液：10.0μg/mL待测样品溶液 四、实验步骤 1、系列标准溶液的制备 取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL) 0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL分别置于25mL的容量瓶中，各加入去离子水稀释至刻度，摇匀。得浓度依次为0.20μg/mL、0.40μg/mL、0.60μg/mL、0.80μg/mL、1.00μg/mL的一系列维生素B2标准溶液。待测。 2、标准溶液及样品的荧光测定 ??? 将激发波长固定在最大激发波长，荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处。测量上述系列标准维生素B2溶液的荧光发射强度。数据记录于表中。以溶液的荧光发射强度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，制作标准曲线。? ? 在同样条件下测定未知溶液的荧光强度，并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓度，计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。五、实验注意事项 、实验数据记录及处理 1、在。 2、由校准曲线查出并计算待测样品溶液中的维生素B2的含量。 、思考题 1.试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因2.维生素B2在pH＝6～7时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？ 实验 火焰原子吸收光谱法测定水中钙含量（4学时） 一、实验目的 1、了解原子吸收光谱仪的构造及使用方法。 2、了解火焰原子吸收分光光度法分析原理。 3、掌握标准曲线法测定元素含量的分析技术。 二、实验原理 原子吸收光谱法是基于气态基态原子外层的电子对共振线的吸收。气态的基态原子数与物质的含量成正比。当式样组成复杂，配制的标准溶液与式样组成之间差别较大时，常采用标准法，本实验就使用标准加入法，基本方法是在五个容量瓶中加等量的待测式样，分别加入不等量（倍增）的标准溶液，用适当溶剂稀释至一定体积后，依次测出它们的吸光度。以加入标样的质量为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线，图中横坐标与标准曲线正常的交点与原点的距离X即为容量瓶所含待