PCR设计流程与原则MicrosoftWord文档..doc

第一章 微生物培养技术 课题研究 在江河湖海、土壤大气、动植物的体内体表微生物无处不在。这 些微小的生物在维持自然生态系统的稳定性上起着极其重要的作用。 微生物具有结构简单、代谢产物多样、生长繁殖迅速、易于培养、 突变率较高等特点是生物学基础研究和实践应用中的重要材料。人 类利用自然界中丰富多样的微生物资源解决了工业、农业及医药卫 生领域中的许多问题。 ▲研究计划 1.查阅微生物培养技术的资料收集有关微生物培养的实验材料。 2.运用微生物培养技术完成所需要微生物的分离和培养。 3.观察微生物菌落的特征。 4.测定特定样品中的微生物数量。 ▲总结交流 1.总结微生物分离和培养的关键技术及注意事项。 2.交流各小组测定的特定样品中的微生物数量提出改善环境或 食品卫生状况的建议。 第一章 微生物培养技术 2 19世纪70年代德国科学家柯赫(R.Koch 1843-1910图1-1-1)研究牛的炭疽病时将病 牛的血液转移到人工配制的养料中在适宜条件 下培养使得血液中的各种细菌大量繁殖形成 了不同形状和颜色的细菌群体。他将这些细菌分 别注射到健康牛的体内结果发现牛的炭疽病是 由炭疽芽孢杆菌引起的。在此过程中柯赫所采 用的细菌培养方法开创了微生物分离(isolation) 和纯培养(pure culture)技术的先河。 自然界中的微生物(microorganism)主要包括细 菌、放线菌、酵母菌、霉菌以及立克次氏体、支原体、病毒等类群。 这些微生物都需要从生活环境中获取各种营养物质以维持自身的生 命活动。由于微生物代谢方式的不同因而对营养物质的需求也是有 差异的。根据这个特点在进行微生物的分离和纯培养时可根据微 生物生长繁殖和代谢的需要将各种营养物质混合在一起配制成适 合微生物生存的营养基质——培养基(culture medium)。其中将溶 化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿冷却凝固后制成的培养基称 为平板培养基。 把相应的研究对象移入培养基中的过程称为接种(inoculation)。在 平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平 板法等。通过这些方法可将所需要的微生物从混杂的微生物群体中分 离出来获得纯种微生物这个过程称为纯培养。实验中要根据实验目 的、培养基种类和实验器皿的差异采用不同的接种方法。接种技术是 进行微生物实验和相关研究(如植物的组织培养)的基本技术。 微生物的生长繁殖还需要适宜的温度一般是将接种后的培养基 放入恒温培养箱中在一定的温度下培养一定的时间以得到所需要 的微生物。 在微生物的分离和纯培养中一定不能有外来的污染性杂菌所以必须采用无菌技术(aseptic technique)进行操作。因此在实验过 程中要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌对工作场所进行消 毒。灭菌(sterilization)是指用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所 有的微生物常用的是高温灭菌法。而消毒(disinfection)一般是用相 对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营 养细胞常用的是射线消毒法和化学药剂消毒法。 大肠杆菌的分离和纯培养 大肠杆菌是人体肠道中普遍存在且容易培养的一类细菌常作为 分子生物学、遗传学和基因工程研究的重要材料。 材料器具 含大肠杆菌的混合菌液牛肉膏蛋白胨培养基附录二、无菌 水酒精灯、接种环、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿、试管 等。 活动程序 1.配制培养基 由教师提供配制好的牛肉膏蛋白胨培养基 配制方法请参考本章第二节的内容 2.接种 采用平板划线分离法进行接种。 接种前的准备工作将所用的实验器材全部放入超净工作台或无 菌箱(室)用紫外灯照射30min。进入无菌室前要用消毒液清洁双手 还需换好工作服、鞋、帽戴上口罩。 第一节 微生物的分离和纯培养 图1-1-2 接种环灭菌 将接种环环端在酒精灯火焰 上烧红再将接种环斜放沿环向 上烧至可能碰到培养皿的部分。 来回数次(图1-1-2)。 第一章 微生物培养技术 4 图1-1-6 平板划线菌落图 在酒精灯火焰附近冷却接种 环。左手拿取混合菌液试管让试 管口缓缓通过火焰灭菌(图1-1-3)。 划线的方法包括连续划线法和交叉划线法(图1-1-6)。 连续划线法是从平板边缘的一点开始连续作紧密的波浪式划线。 交叉划线法是从平板的一边作第一次平行划线若干条。转动培养 皿约70°角将接种环在火上灼烧并冷却后通过第一次划线部分将接种环伸入试管内沾取 一环混合菌液(图1-1-4)。 左手持培养皿并开启一条缝 隙右手将接种环迅速伸入平板 进行划线(图1-1-5)。 采用连续划线法经培养得到的菌落采用交叉划线法经培养