发酵工业无菌技术课件.pptVIP

第四章 发酵工业的无菌技术 4.1 灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 培养基灭菌的目的 1，在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果： 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难 杂菌会降解目的产物； 杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品； 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。 4.2发酵工业污染的防治策略 4.2.1污染的危害 1.使生物反应的基质或产物，因杂菌的消耗而损失，造成生产能力的下降。 2. 杂菌也会产生代谢产物，这就使产物的提取更加困难，造成得率降低，产品质量下降。 3. 有些杂菌会分解产物，使生产失败。 4. 杂菌大量繁殖后，会改变反应液的pH值，使反应异常。 5. 如果发生噬菌体污染，生产菌细胞将被裂解，使生产失败。 4.2.2杂菌污染的防治 杂菌的检查与类型判断 显微镜检查法 平板划线培养 肉汤培养 发酵过程的异常观察法：溶解氧水平异常变化、通过传感器或取样分析观察PH的变化、尾气中CO2异常变化 污染的原因分析 种子带菌、空气带菌、设备渗漏、灭菌不彻底、操作失误和技术管理不善 分析污染杂菌的种类 分析污染杂菌的时间 分析污染杂菌的程度 杂菌污染的途径及其预防 种子带菌及其预防： 1.培养基及其器具彻底灭菌 2.避免菌种在移接中污染 3.避免菌种在培养和保藏中污染 过滤空气带菌及其防治 设备的渗漏或死角染菌及其防治 培养基灭菌不彻底导致染菌及其防治 操作不当造成染菌 噬菌体染菌及其防治 4.3发酵工业的无菌技术 工业上具体措施包括： （1）使用的培养基和设备须经灭菌； （2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； （3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； （4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； （5）使用无污染的纯粹种子。 灭菌的方法 （1）化学法 化学药品灭菌法 （2）物理法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 过滤除菌法 火焰灭菌法 4.4发酵培养基及设备管道灭菌 4.4.1湿热灭菌原理 lnN0/N=kt 2.303logN0/N=kt t=2.303 /k logN0/N 对数残存规律 工厂的经验数据，高温灭菌时间15－30s,维持8－25min。 培养基达到完全灭菌时，灭菌温度和灭菌时间对培养基养分破坏的比较（以VitB1为准） 灭菌温度0C 灭菌时间min 营养成分破坏率（％） 100 400 99.3 110 36 67 115 15 50 120 4 27 130 0.5 8 145 0.08 2 150 0.01 1 4.4.2 培养基灭菌的工程设计 一、无菌的标准 根据微生物热死灭方程，要求灭菌后达到绝对无菌是很难做到的，也是不必要的。因此在工程设计中常取N=10-3。 二、分批灭菌 分批灭菌的设计 在发酵罐中进行实罐灭菌，是典型的分批灭菌。全过程包括升温、保温、降温三个过程。 采用一台连续灭菌设备，培养液流量为18m3/h，发酵罐装料量为36m3，原始污染度为106个，要求灭菌度N＝10-3个罐，灭菌温度为398k，查图得此时得反应速度常数＝11min-1，试求维持时间t。 解：发酵罐培养液原有菌数： ＝36× 106 × 103× 103＝ 3.6 × 1013(个/罐） 由公式得： t=2.303/k