(精)茶专《茶树病虫害防治》实验课件.pptVIP

实验一 9月18日 实验二 9月25日 实验三 10月15日 实验四 11月5日 实验五 12月2日 实验六 12月4日 实验七 12月9日 实验八 12月24日 实验九 12月31日 材料与设备 （一）材料 病害新鲜材料、标本、挂图，病原菌玻片、多媒体课件等。 (二)设备 显微镜、扩大镜、载玻片、盖玻片、镊子、挑针、解剖刀、小剪刀、培养皿、贮水小滴瓶、乳酚油滴瓶、新刀片、毛笔等。 实验内容 （一）鞭毛菌观察 1、游动孢子的观察 取一清洁凹载玻片，丁凹心处四周涂少量凡士林油备用；另取一张清洁盖玻片放平，在其中央滴加1滴蒸馏水，用解剖刀从霜霉病新鲜材料叶背面刮取新形成的孢子囊，置于盖玻片的小水滴中；接着将盖片翻转过来，轻轻放在凹玻片上，使盖片边缘与凹心周围的凡士林粘合，以防水滴蒸发，然后将玻片平放在培养皿内，于20℃左右的温度下经30min培养后镜检，即可看到游动孢子的形成。 2、卵孢子观察 任取一种霜霉病的病斑枯死组织，剪成3-4mm见方的小块放在小试管内，随即滴入15％KOH溶液(或加乳酚油亦可)于酒精灯上加热透明至枯死组织脱去黄褐色为止，冷却后取一小片病组织放在载玻片中央，滴一滴蒸馏水或乳酚油，加盖玻片镜检组织内的卵孢子。 3、孢囊梗和孢子囊的观察 用挑针挑取瓜果腐霉菌的絮状菌丝体于载玻片水滴中，加盖玻片制成临时装片进行镜检，观察菌丝体、孢囊梗与孢子囊。 也可用解剖刀从霜霉病材料背面剖取霉状物，制成临时装片观察孢囊梗和孢子囊。 （二）接合菌的观察 1、营养体和无性繁殖体观察 用丛根霉菌体材料，用挑针挑取孢子囊呈白色和黑色的分别制成临时装片，镜检比较其区别，注意匍匐菌丝有无分隔、假根形态、孢囊梗着生部位，黑色孢子囊破裂后，散出孢囊孢子形态、大小、色泽。 2、接合孢子观察 镜检根霉菌接合孢子装片。 （三）子囊菌观察 1、子囊菌菌丝体及无性孢子观察 挑取白粉病病叶表面的白色粉霉状物制片，置显微镜下观察，注意菌丝有无分隔，分生孢子梗形态及分生孢子着生情况。 观察白粉病病菌菌丝伸入寄主组织的吸器。 2、子囊菌有性孢子及子实体观察 观察白粉菌的闭囊果——挑取白粉病病叶表面的黑色小颗粒制片，在低倍镜下观察闭囊果的形态、颜色。用挑针在闭囊果上方的盖玻片上轻压，挤出闭囊果中的子囊；观察白粉病菌闭囊果内子囊的数目。 3、观察小麦赤霉病子囊壳形状及着生情况及其内子囊着生情况(示范)。 4、观察子囊盘形状及着生情况（示范）。 （四）担子菌观察 1、锈菌冬孢子萌发的观察 结合当地情况任选一种冬孢子萌发材料(如桧柏上梨胶锈菌的冬孢子角)，用挑针挑取萌发的冬孢子少许，制成临时装片镜检，观察担子的分隔，担孢子的数目及形态特征。 2、夏孢子堆的观察 任选一种夏孢子堆尚未破裂的小麦秆锈，叶锈或条锈病材料，制成临时装片镜检。 3、冬孢子的形态观察 取麦类锈病、蚕豆锈病或菜豆锈病带冬孢子堆的材料，用解剖刀刮取冬孢子制片进行观察。 4、担子菌大型子实体观察，观察木耳、灵芝及蘑菇的外部形态。 （五）半知菌的观察 1.观察茶轮斑病病叶的症状特点，注意病部的黑色小粒的着生情况，用挑针或用刀片切取小黑粒，在镜下观察，注意分生孢子形状、大小及颜色。 2.观察黑腐病病菌的菌丝分枝角度和分枝交界处的缢束现象。 3.病组织内菌体观察，为了能真切地看清菌体，除用切片法观察外，有的材料需要进行透明而后观察，较常用的透明方法是水合氯醛法。 （六）细菌基本形态的观察取纽菌三种形态的装片镜检。 革兰氏染色反应的观察 （1）涂片 取两块清洁的载玻片平放桌面上各滴加l滴无菌水，用接种环分别从新鲜材料溢脓处和菌种中挑取少量细菌，涂成菌膜。 （2）固定 将涂片在酒精灯火焰上方通过数次，使菌膜干燥固定。 （3）染色 (1)在菌膜上加1滴结晶紫液染色1min；(2)用洗瓶把多余的结晶紫液轻轻冲去，加碘液冲去残水；(3)再加1滴碘液媒染1min；(4)再水洗去碘液，滤纸吸去多余水分； （4）滴加95％酒精，脱色20-30s。；(6)用水洗去酒精，滤纸吸干后再以藏花红复染0.5～1min；(7)用水洗去复染剂，吸干备用。 （5）镜检从低倍镜到高倍镜，细菌被染成蓝紫色，为革兰氏染色阳性反应，红色为阴性反应。 （6）细菌的鞭毛观察用示范片供镜检。 （七）线虫的观察 取花生根线虫或茶苗根结线虫病材料，以挑针轻轻挑开根结，小心挑取乳白色小颗粒状物，置于载玻片中镜检，观察呈梨形的雌虫的特征；另将虫瘿用挑针压碎，注意找出呈线状的雄虫，观察其特征。 （八）寄生性种子植物的观察 观察所给寄生性种子植物的标本，注意其特征。 作业 1.绘霜霉病菌形态图。 2.绘根霉菌匍匐菌丝、假根、孢子囊、孢囊梗、孢囊孢子及接合孢子的形态图