葡聚糖凝胶层析脱盐课件.pptVIP

* 生化实验六 学习凝胶层析的工作原理和操作方法； 掌握利用葡聚糖凝胶层析进行蛋白质脱盐的技术。 目 的 原 理 凝胶层析又称凝胶过滤，分子筛或排阻层析。 凝胶过滤的主要装置是填充有层析介质的层析柱。 凝胶是一种具有多孔、网状结构的分子筛。利用这种凝胶分子筛对大小、形状不同的分子进行层析分离，称凝胶层析 。 原 理 1、层析介质的特点 （1）遇水为不溶解的固相； （2）是化学惰性物质； （3）离子基团含量少； （4）颗粒大小和网眼均匀； （5）机械强度较强； （6）具有可选择的多种孔径。 原 理 O 目前使用较多的是葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶及其衍生物。 葡聚糖凝胶（商品名称Sephadex）是最常用的层析介质。它是由一定平均分子量的葡聚糖和交联剂1-氯-2,3-环氧丙烷（CH2-CH-CH2Cl）交联成的具有三维结构不溶水 的高分子化合物。调节葡聚糖和交联剂配比，可以获得网眼大小不同，型号各异的凝胶。 原 理 当葡聚糖分子量越小，交联剂用量越大，则交联度越大，凝胶网眼越小，吸水量越小，G值也越小。 G值表示每克干胶吸水量（mL）的十倍。 例如Sephadex G-25其吸水量应为2.5mL/g干胶。 常用的葡聚糖凝胶有多种规格，如G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100等。 原 理 2、