(精)微生物学：第七章微生物的遗传和变异.pptVIP

第七章微生物的遗传变异 原生质体融合的一般原理和主要过程 先准备两个有选择性遗传标记的突变株，在高渗溶液中，用适当的脱壁酶(如细菌可用溶菌酶或青霉素处理，入线菌可用溶菌酶或相应的脱壁权衡利弊，真菌可用蜗牛酶或相应的脱壁酶等)去除细胞壁，再将形成的原生质体离心聚集，并加入促融合剂PEG(聚乙二醇)促进融合，然后在高渗溶液中稀释，涂在能使其再生细胞壁 或进行分裂的培养基上，待形成菌落后，通过影印接种法，将其接种到各种选择性培养基上，最后鉴定它们是否是重组子 溶源转变 温和噬菌体的基因整合到宿主核基因组上的现象 温和噬菌体并不携带外源供体菌的基因 这种温和噬菌体是完整的，而不是缺陷的 获得新性状的是溶源化的宿主细胞，而不是转导子 获得的性状可随噬菌体的消失而同时消失 染色体外遗传因子的转移与重组 一、质粒 转移性质粒、非转移性质粒 二、细菌转座因子 插入序列：只含有编码转座所必需的基因 转座子：含有编码转座所必需的基因和其他抗性基因 转座噬菌体：温和噬菌体 （一）有性杂交 （二）准性杂交 菌丝联结 异核体的形成 形成双倍体 分离子的产生 第四节、真核微生物的杂交育种 遗传变异知识的应用 自发突变与育种 从生产中选育 定向培育优良品种 诱变育种 从青霉素产量看诱变育种 诱变育种的基本环节 诱变育种的原则 诱变育种的定义 诱变育种 诱变育种就是利用物理或化学诱变剂处理均匀分散的微生物细胞群，促进其突变频率大幅度提高，然后设法采用简便、快速和高效的筛选方法，从中挑选少数符合育种目的突变株，以供生产实践或科学实验之用。 诱变育种除提高产量外，还可改进产品质量、扩大品种和简化工艺等目的。它具有方法简便、工作速度快和收效显著等优点，仍是目前最广泛使用的育种手段。 效价：指有效成分的浓度。1ug/ul称为1 单位 1945 时间 1943 1943 1943 1947 1955 1971 1977 目前 发酵单位(u/ml) 100 250 500 ～850 ～850 ～8000 ～2万 ～5万 5～10万 从 青 霉 素 产 量 看 诱 变 育 种 染色体畸变 某些理化因子，如Ｘ射线，紫外线， 亚硝 酸等，除能引起点突变外，还会引起DNA分 子大损伤，包括染色体易位，倒位，缺失，重复等，即为染色体畸变。 染色体畸变 紫外线诱变作用机理 可使ＤＮＡ链裂断，破坏核糖和磷酸间的键联 引起胞嘧啶和尿嘧啶产生水合作用造成氢键断裂 能使胸腺嘧啶成二聚体，使ＤＮＡ结构发生改变 转座因子(transposible element),跳跃基因(jumping gene)在染色体组中或染色体组间能改变自身位置的一段DNA顺序。 染色体畸变 插入序列(insertion sequence)：分子量小，0.7~1.4kb，只能引起转座效应而不含其它任何基因。 转座子(Tn, transposon)：分子量为2~25kb，含有几个到十几个基因。能插到受体DNA分子的许多位点上。 Mu噬菌体(mutator phage)：是E. Coli的一种温和噬菌体，分子量大，约37kb，含20多个基因，可以引起插入突变。 DNA的损伤修复 ? DNA的损伤：DNA在复制时产生错配、病毒基因整合，某些物化因子如紫外光、电离辐射和化学诱变等，破坏DNA的双螺旋结构，从而影响DNA的复制，并使DNA的转录和翻译也跟着变化，因而表现出异常的特征（生物突变）。 ? 若DNA的损伤或错配得不到修复，会导致DNA突变。其主要形式： 一个或几个碱基被置换 插入一个或几个碱基 一个或多个碱基对缺失 ? DNA的损伤修复—— 5种修复途径: 错配修复、光复活修复、切除修复、重组修复和诱导修复（亦称暗修复）。 光复活修复：400nm左右的光激活光复活酶，专一分解紫外光照射引起的同一条链上的TT（或CC，CT）二聚体。（包括从单细胞生物到鸟类，而高等哺乳动物无） 切除修复：将DNA分子中的受损伤部分切除，以完整的那条链为模板再重新合成。特异内切酶、DNA聚合酶、 DNA外切酶、DNA连接酶均参与。（发生在DNA复制前） 重组修复（发生在复制后）：复制时，跳过损伤部位，新链产生的缺口由母链弥补，原损伤部位并没有切除但在后代逐渐稀释。 诱导修复：造成DNA损伤或抑制复制的处理均能引起一系列复杂的诱导效应,称为应急反应(SOS response)。此过程诱导产生切除修复和重组修复中的关键蛋白和酶，同时产生无校对功能的DNA聚合酶。所以会有2种结果：修复或变异（进化）。 细菌的基因重组 原核微生物 通过转化、接合、转导、原生质体融合等形式进行 一 部分物质转移和基因