基因工程、细胞工程专题复习试题.doc

基因工程 基因工程的基本工具 用来切割目的基因和载体的工具：限制性核算内切酶。可是DNA分子中某特定核苷酸序列的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子靠DNA连接酶完成。根据来源不同分为：E·coliDNA连接酶：连接黏性末端；T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 将目的基因送入受体细胞的载体有：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 2．基因工程的操作程序 (1)目的基因的获取 ①从基因文库中获取。 ②利用PCR技术扩增： PCR过程中需要酶、底物、模板、引物和能量等条件。 ③人工化学方法合成 ： 已知mRNA序列，利用反转录法合成目的基因的过程是：以mRNA为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下，合成双链DNA分子； 已知蛋白质的功能根据蛋白质工程合成目的基因的过程是：根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测DNA中脱氧核苷酸的排列顺序，通过化学方法合成。 (2)基因表达载体的构建（基因工程的核心） ①基因表达载体的构建方法 用同种限制酶切割目的基因和载体的目的：让切割得到的目的基因和载体含有相同的粘性末端。 ②基因表达载体的组成： 目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。 启动子：