基因工程2——实验1：质粒DNA的小量制备试题.ppt

基因工程实验技术 实验一 质粒DNA的小量制备 实验目的要求： 1、掌握用碱裂解法小量制备质粒DNA 2、了解制备原理及各种试剂的作用 一、背景知识（载体及质粒） 二、实验原理（碱裂解法） 三、实验材料 四、实验步骤 五、预期结果 六、注意事项 一、背景知识——载体及质粒 1、载体功能： 为目的基因提供进入受体细胞的转移能力。 为目的基因提供在受体细胞中的复制能力或整合能力。 为目的基因提供在受体细胞中扩增和表达能力。 2、载体种类 质粒、噬菌体、腺病毒载体、逆转录病毒载体…… 3、理想载体的基本条件 可转移性 合适的复制位点 多克隆位点：广泛、特异 选择标志，便于筛选和鉴定 分子较小，可容纳较大的外源DNA 4、质粒 （1）特点： 存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子。 具有自我复制功能。 带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物。 经改造后具有多克隆位点。 举例：pMD-18T质粒 二、碱裂解法小量制备质粒DNA原理 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。 碱裂解法提取质粒主要包括三个部分： （1）裂解细胞 加入碱性SDS，破壁与膜，处理的同时也能去除细胞碎片、染色体DNA等杂质。碱性SDS法相对较剧烈，只能抽提小于10 kb的质粒。 （2）分离