基因工程4——实验3：聚合酶链式反应技术试题.ppt

实验三 聚合酶链式反应技术 （PCR技术） 实验目的与要求 掌握PCR反应原理 学习引物序列的设计 学习PCR反应体系的设计 学习PCR反应程序参数的设计 学习通过聚合酶链式反应(PCR)在体外大量扩增位于两段已知序列间的DNA区段。 Contents 一、实验原理 1、聚合酶链式反应技术简介 2、基本原理及特点 3、一个典型PCR的反应体系及程序参数介绍 4、DNA聚合酶 5、寡核苷酸引物的设计 1、聚合酶链式反应技术简介 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是1983年，美国科学家K. B. Mullis发明的一种体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。 PCR技术已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命，目前它在分子克隆， 目的基因检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广泛的应用。 2、PCR技术基本原理及特点 PCR技术实际上是在模板DNA， 引物和４种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，大量扩增位于两段已知序列间的DNA区段。 反应主要涉及三个反应的循环： ①高温变性（denaturation），发生链的分离； ②低温退火（annealing），发生引物杂交； ③适温延伸（extension），发生DNA合成。 PCR反应