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微免实验复习整理(图文详尽版本).
(一) 实验一
■ 大吞噬现象、小吞噬现象
吞噬功能的测定计数方法:
①吞噬百分率:计数100个中性粒细胞中具有吞噬作用的细胞数,即为吞噬百分率。
②吞噬指数:观察100个中性粒细胞,计数被吞噬的细菌总数,求平均每个中性粒细胞吞噬的细菌数即为吞噬指数。
·大吞噬现象要认识“巨噬细胞”
·小吞噬现象主要认识“中性粒细胞”(马蹄状形)
(二)实验二
■ 淋巴细胞转化试验(原理、分型、意义)
1、原理:T淋巴细胞可以在分裂剂的刺激下,向母细胞转化。促分裂剂能选择性地激发T淋巴细胞合成DNA与细胞分裂。转化百分率正常值为70%左右
2、分裂相:即染色体型
3、母细胞:较小淋巴细胞大4-5倍;核质疏松呈网状结构,有1-3个核仁;核周透明区;胞浆嗜碱性,有空泡
4、过渡型:较小淋巴细胞略大;核质略疏松;着色较淡
5、小淋巴细胞:核质致密;着色深;胞浆少
6、意义:体外淋巴细胞转化反应,可为测定机体细胞免疫状态的指标之一。
■ E玫瑰花环实验
1、原理:T细胞表面有绵羊红细胞受体,可在自然情况下与绵羊红细胞结合,形成E玫瑰花环,由此可区分T淋巴细胞与B淋巴细胞
2、判定结果:凡是淋巴细胞周围围绕4个以上绵羊红细胞者为阳性
■ 血清学反应
1、基础:抗原决定簇——抗体的互补决定区
2、特点:特异性、可逆性、 比例性、阶段性
3、抗原抗体反应因素:电解质、温度、酸碱度
4、抗原或抗体的检测方法:凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术
I 凝集反应:(直接、间接)
概念:抗原 + 抗体 = 凝集团块
直接凝集:颗粒性抗原 + 抗体 = 凝集团块( 玻片法、试管法)
⑴直接凝集反应——玻片凝集反应
定性;用已知抗体检测颗粒性抗原;细菌的诊断和分型,红细胞ABO鉴定
出现白色凝集块,属于阳性反应
⑵直接凝集反应——试管凝集反应(半定量,诊断伤寒副伤寒)
间接凝集:可溶性抗原包被于载体 + 抗体 = 凝集团块
反向间接凝集:抗体包被于载体 + 抗原 = 凝集团块
协同凝集:抗体结合金葡菌SPA + 抗原 = 凝集团块
II 沉淀反应:(单项、双向)
概念:可溶性抗原 + 抗体 = 沉淀物
① 单向琼脂扩散
单向琼脂扩散试验是一种定量试验。将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在适当位置打孔,将抗原加入孔中扩散,与板中抗体相遇,在比例合适处呈现白色沉淀环,环的直径与抗原含量成正比。
主要用于测定血清各种Ig和补体成分的含量
② 双向琼脂扩散
可用于分析和鉴定标本中多种抗原成分(抗原、抗体同时扩散(自由、定向)
③ 对流免疫电泳
在相应抗原抗体孔之间可见白色沉淀线。
④火箭电泳:抗原定量试验(抗体琼脂板、抗原扩散(自由、定向)
将一定量已知抗体混于琼脂中,制板,在板的一端打一排小孔,加入待检样品,置于阴极端进行电泳。抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰,状如火箭,称火箭电泳。沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比。敏感度与单扩相仿,但需时较短。
III 直接凝集反应—玻片凝集
(三)实验三
■ 补体结合实验
■ 中和反应实验:(病毒中和实验、毒素中和实验)略
■免疫标记技术:
1、概念:将已知抗体标记上显示性物质,通过检测标记物,反映有无抗原抗体反应,从而间接测出微量的抗原或抗体。
2、原理:免疫标记技术是在免疫学、生物化学及显微镜术进展的基础上发展起来的一项技术,具有特异、敏感、快速的特点。将荧光色素(常用异硫氰基荧光黄,简称FITC)与特异性抗体(或抗原)以共价键基团牢固结合,但不影响该血清抗体的免疫特性。这种荧光标记的抗原抗体复合物,可通过荧光灯源中产生的紫外光或蓝紫光激发产生荧光,而从荧光显微镜加以观察。
3、常用的标记物有: 酶、荧光素、放射性同位素、胶体金、生物素、电子致密物等。
■ E L I S A(酶联免疫吸附试验)
1、原理:把抗原抗体的免疫反应和酶(主要有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的高效催化作用有机地结合起来,并仍保持其免疫和酶的活性。结合在抗原抗体复合物上的酶在遇到相应的底物时,可以催化底物水解、氧化或还原,从而产生有色的物质。颜色反应的深浅与抗体或抗原的量成正比。
2、方法:主要有间接法(用于测抗体)和双抗体夹心法(用于测抗原)。
■ 革兰染色
1、意义:对细菌鉴别、选择抗菌药物、研究细菌致病性等有重要意义。
2、原理:与细菌细胞壁有关,尚未完全阐明。
阴性—红色 阳性—蓝色
■ 细菌学总论
①细菌是一类具有细胞壁的单细胞微生物,形体微小,一般以微米(μm)作为测量单位。
②细菌按其外型可分为球菌、杆菌、螺型菌三大类。
③不同种类的细菌大小不一,大多数球菌直径约1μm,杆菌长2~5μm,宽0.3~1μm。
④细菌的特殊结构:荚膜、鞭毛、芽孢、菌毛
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