国际上牛胚胎移植应用现状..docxVIP

国际上牛胚胎移植应用现状日期：2006-07-05　　来源：? 桑润滋(河北农业大学动物科技学院、河北省牛羊胚胎工程技术研究中心,河北保定071001)???? 笔者于2002年6月20日-7月8日和2004年3月19日-4月7日两次赴澳、新、韩三国访问。现将上述几个国家有关牛胚胎移植应用情况归纳如下：??? 1? 体内胚胎生产（超排排卵）与胚胎移植情况??? 1.1? 阿根廷莫纳胚胎移植公司??? 1.1.1? 超排方法??? 0天放入第一个CIDR（孕酮栓）+肌注P4（孕激素50毫克）+肌注EB（雌激素2毫克）；第7天撤掉第1个CIDR，放入第2个CIDR+肌注P4（50毫克）+肌注EB（2毫克）；第11天注FSH，早、晚各1次；第12天注F5H，早，晚各1次；第13天注FSH，早，晚各1次；第14天注FSH，早，晚各1次，并且早晨撤掉第2个CIDR，早，晚各注PG1次：第15天早注FSH1次；第16-17天发情，AI；第23-24天采胚。??? 1.1.2? 胚胎移植规模??? 用上述方法每年超排牛4000-5000头，头均获可用胚胎6枚左右，最高1头获69枚胚胎。??? 1.1.3? 移植水平见下表??? ???? 本结果为卡罗斯、莫纳在墨西哥1994年移植结果。胚胎为超排7天采得的桑椹胚和早期囊胚。其中，桑椹胚移植成功率为66.6%，早期囊胚为72.09%。??? 1.2? 法国Salers牛，每年胚移10000头以上，鲜胚妊娠率70%左右，主要用于选种。??? 2? 用屠宰场母牛卵巢卵母细胞体外生产胚胎??? 据新西兰的海青兰讲，他们和新西兰皇家农科院合作，每周可生产胚胎1000枚，每年生产5万枚左右。??? 3? 澳大利亚SPB采用活体采卵（OPU）、体外受精（IVF）和胚胎移植（ET）对牛进行集中繁殖??? 通过使用活体采卵（超声导向和阴道探头（TVR））、体外受精、胚胎移植三项技术对成熟供体进行胚胎生产和移植。??? 集中繁殖系指卵子直接从供体牛的卵巢上获得，在实验室进行体外受精并发育到一定阶段，然后将胚胎移入受体腹中。因为它可以使优良基因性状的供体牛在一个季节生产若干个后代。??? SPB采用OPU-IVF-ET对牛进行集中繁殖生产主要包括以下八个步骤：??? 健康检查、供体牛选择、卵子收集、体外受精和胚胎生产、受体牛选择与同期发情处理、胚胎的移植、妊娠诊断、接产与产犊。??? 3.1? 健康检查??? 供体母牛必须身体健康，生殖系统良好，先前做过MOET的母牛或具有生殖疾病的母牛被列为“劣质牛”，因为这样的母牛不能高效而准确地生产胚胎。先前做过MOET的母牛可能由于操作或激素的原因造成黏连或卵巢囊肿、卵巢静止等。??? 3.2? 供体牛选择??? 3.2.1? 适宜活体采卵母牛的生理时期??? 3.2.1.1? 14月龄以上发情周期正常的青年牛和成年母牛。??? 3.2.1.2? 分娩后恢复发情周期的泌乳母牛，且未在产乳高峰期的母牛。??? 3.2.1.3? 干奶期的母牛。SPB（南太平洋生物技术有限公司）认为，干奶期的母牛是最好的供体选择。??? 3.2.1.4? 人工授精后3-4周未出现返情的母牛或怀孕3个月以上的母牛。??? 3.3? 卵子收集??? 3.3.1? 活体采卵基本方法??? SPB活体采卵方法是“超阴道法”，它是靠超声波来帮助介导的，已经被证明无任何采集后的综合症。采卵后的7-15天母牛会发情，这时进行人工授精可以使母牛正常妊娠。该方法非常简单。（1）先将母牛麻醉，并且使母牛保持站立姿势。（2）将超声波探头插入阴道，探头会将信号传输到屏幕上，从而在荧幕上出现卵巢和卵泡的形态与位置，这种阴道探头有一个重19克的细针，该细针通过硅管与真空泵相连，细针可以直接插入卵泡，将卵子吸入到收集管中。该程序对母牛不会产生痛苦，比人工授精和胚胎移植要安全。??? 3.3.2? 活体采卵间隔时间及水平??? 母牛每周采卵1-2次。可间隔3-4天进行连续的采卵，对于正常母牛，无须进行激素刺激；但是当母牛采卵数少于7个时，可用外源激素进行适当调节。通常的做法是每14天做一次外源激素刺激；每收集一次卵子，可培养发育1.5-2.0个A、B级胚胎，这样一周采集2次，可获3.0-4.0个优质胚胎；每周两次的卵子收集要比间断性的采卵效率高，连续采卵会提高母牛的采卵数量与质量。??? 3.3.3? 影响活体采卵的因素及采卵效率??? 3.3.3.1? 对于有过生殖疾病的母牛或做过MOET的母牛，即使现在它们的生殖系统健康，不能期望高于平均值。??? 3.3.3.2? 老年母牛采卵数少，并且质量很差。??? 3.3.3.3? 泌乳期的母牛，尤其在泌乳高峰期，采卵数会很低。??? 3.3.3.4? 营养状况十分重要，母牛处于