选修三知识点答题.docx

基因工程专题考点一、基因工程的概念基因工程：也叫基因拼接技术或DNA重组技术，指按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另外一种生物的细胞中，定向改造生物遗传性状的过程。考点二、基因工程的三种基本工具　 1. 限制性核酸内切酶——基因的剪刀（1）来源：主要来自于原核生物——细菌（2）特点——专一性①含义：限制酶的专一性是指其可识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并在特定部位对DNA分子进行切割。②意义：使限制酶可准确切割的所需的目的基因。（3）作用部位：限制酶的作用部位为脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键（4）产生末端的类型及特点：①类型：限制酶在对DNA双链进行切割时，按照切割的方式，可以分为错位切和平切两种，可产生两种末端：黏性末端、平末端。黏性末端，如下图：错位切是在两条链的不同部位进行切割，之间相隔几个核苷酸，切开后形成的两个末端有一截为单链，这样的末端可通过其单链上碱基的互补配对相互连接，故称为黏性末端。平末端，如下图： 平切是在两条链的相同部位进行切割，形成两个无黏性末端的平口，称平末端。②特点： 同一限制酶切割DNA双链形成的末端相同，且为黏性末端时，可通过碱基互补配对相连接。2. 基因工程中的运载体（1）运载体的种类：质粒、噬菌体、动植物病毒运载体的化学本质为DNA，可以与目的基因（DNA片段）连接，最常用的运载体为质粒。质粒主要存在于细菌细胞质，酵母菌中也有，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核或染色体DNA之外的环状DNA。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到染色体DNA中，随着染色体DNA的复制而复制。（2）基因工程对运载体的要求基因操作过程中使用运载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制；三是使目的基因可成功表达。这就要求运载体具有以下特点：特点目的①需有启动子和终止子使目的基因可成功表达②具有复制原点使运载体具备自我复制的能力，或整合到受体DNA上后可随受体DNA的复制而复制，从而使其上的目的基因也跟着复制③带有标记基因，一般为抗生素抗性基因以便对成功导入目的基因的受体细胞进行筛选④运载体必需有一个或多个限制酶的切割位点以便目的基因可以插入到载体上去要点诠释：实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备我们要求的条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。　　　　　　　　　　?　　?3. DNA连接酶——基因的针线（1）类型： T4DNA连接酶（来自噬菌体）、E.coliDNA连接酶(来自大肠杆菌)噬菌体T4DNA连接酶可连接黏性末端或平末端，而大肠杆菌DNA连接酶只能连接黏性末端。　?　　考点四、基因工程的步骤基本操作步骤为：提取目的基因→基因表达载体的构建→将目的基因导人受体细胞→目的基因的检测与鉴定1、提取目的基因目的基因可直接从目的基因供体中提取，但常用的方法为以下3种：（1）从基因文库获取基因　 ①基因文库的概念：用重组DNA技术将某种生物细胞的总DNA或染色体的所有片段随机连接到基因载体上，然后转移到适当的宿主细胞中。通过细胞增殖而构成各个片段（基因）的无性繁殖系（克隆），这一组克隆的总体就被称为某种生物的基因文库。②基因文库的种类：可以分为基因组文库和cDNA文库（部分基因文库）。基因组文库可包含一种生物的所有基因 ，而cDNA文库只包含了一种生物的部分基因。（2）PCR技术扩增目的基因　　PCR是聚合酶链式反应，它模拟DNA聚合酶在生物体内的催化作用，在体外进行特异DNA序列的聚合及扩增。它包括3个基本步骤①变性：双链DNA片段在94℃下解聚为单链；②复性（退火）：两种引物在适当温度（50℃左右）下，与模板DNA的目的序列通过碱基互补配对形成氢键，而结合；③延伸：温度为热稳定DNA聚合酶的最适温度（72℃），在模板DNA、引物、dNTP（提供原料：四种脱氧核苷酸）、适宜缓冲液（Mg2＋）构成反应混合物中，在热稳定DNA聚合酶的催化下，对一对引物（引物1、引物2）所界定的DNA片段进行扩增。要点诠释：①PCR技术扩增DNA片段是通过上述三步反应的不断循环完成的。由于每一循环所产生的DNA片段均能成为下一次循环的模板，故PCR产物是以指数方式增加，理论上每一轮循环可使DNA数量增加一倍。如经过20个循环后，特定DNA片段的数量在理论上可增加约106倍，从而实现了体外DNA分子的大量迅速扩增。　（3）人工合成目的基因　　化学合成法：基因比较小，且核苷酸序列可知时，可用化学方法来人工合成。反转录法：　　经反向转录酶的作用，以 mRNA为模板获得与mRNA顺序互补的DNA单链，然后再复制形成双链DNA（cDNA）。反转录操