植物生理学实验论文张寿丽..doc

干旱胁迫对小麦幼苗某些生理生化指标的影响 （班级：13应生 学号：134120258 姓名：张寿丽） 摘要： 以小麦种子为实验材料，用TTC和曙红染色的方法测定小麦种子的发芽率。 再以正常生长的小麦幼苗和干旱胁迫七天的小麦幼苗为实验材料，用对照的实验方法，通过紫外分光光度计测定小麦幼苗抗氧化酶（POD）活性及丙二醛（MDA）、脯氨酸（Pro）、谷胱甘肽（GSH），H2O2的含量变化，得出干旱胁迫对上述这些生理生化指标的影响。实验结果表明：干旱胁迫下，小麦幼苗的抗氧化酶(POD)活性及丙二醛(MDA)，脯氨酸（Pro），谷胱甘肽（GSH），H2O2的含量均增加，表现出有效的抗旱效应，说明在干旱胁迫下，植物能够通过合成自身所需的以上物质来达到抗旱的作用，而且这些物可以作为植物抗旱的指标来对植物进行抗旱评价。 关键词：小麦、发芽率、干旱胁迫、生理生化指标。 引言： 干旱是植物最易遭受的胁迫之一，每年由于干旱胁迫给农业造成的损失几乎相当于其他所有环境因子胁迫所造成的损失的总和。[1] 干旱胁迫对植物的影响是一个复杂的生理生化过程，涉及到许多大分子和小分子。[2]研究表明，有理的脯氨酸在植物细胞抵抗非生物胁迫的过程中扮演着非常重要的角色，许多新的生理生化功能也逐渐被发现。干旱是一种最常见的胁迫，遇此逆境作物进行气孔调节外，渗透调节也是一种有效的方法。原理是通过加强合成代谢，增加细胞内渗透物质浓度，降低渗透势，维持膨压和细胞正常生理功能。脯氨酸作为水溶性最大的氨基酸具有较强的水合能力，是理想的渗透介质。作物遇到干旱是它的积累有助于细胞或组织持水，防止脱水，故可视为作物对干旱环境的一种适应。 已经证明了在逆境条件下脯氨酸的积累来抵抗植物对非生物胁迫的伤害，植物体内的抗氧化系统也能将伤害细胞的活性氧控制在可忍耐的水平内，通过各种过氧化酶的协同作用，可以把细胞内产生的具有很强氧化性的活性氧如O2，H2O2，0H-等直接或间接的清除，防止了活性氧放大联级作用，保证了细胞内生命活动的正常进行。 丙二醛是由植物衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的，对干旱也具有抵抗作用。 GSH作为生物体内最主要的非蛋白巯基和含量最丰富的低分子量多肽，在植物抗逆中直接参与许许多多的功能活动。列如当细胞内生成少量H2O2是，GSH在谷胱甘肽过氧化物酶的作用下，把H2O2还原成H2O，其自身被氧化为GSSG，GSSG由存在于肝脏和活细胞中的谷胱甘肽还原酶催化作用下，接受H还原成GSH,使体内自由基的清除反应能够继续持续进行。所以在干旱胁迫中由于细胞被破坏并产生有毒物质H2O2等，细胞机体就会合成H2O2等有毒物质，细胞机体就会合成大量的GSH保护自身。 一、实验材料及试剂、仪器 1、实验材料：50粒吸胀的小麦种子，正常生长的小麦幼苗，干旱处理过的小麦幼苗。 2、实验试剂：TTC染液，曙红染液，3%磺基水杨酸（SSA），冰乙酸，茚三酮，PBS(pH=7.8) ，0.6%TBA（用10% TCA配制）， PBS (pH=6.8，内含1mMHA)，0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] ，PBS（pH=6.0,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP）， POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚，5 mmol/L H2O2,用PBS溶解），PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚，用PBS溶解）5%三氯乙酸，PBS (pH=7.7) ，4 mM DTNB (用0.1M pH=6.8PBS现配)。 3、实验仪器：分光光度仪，离心机，试管，微量加样器，研钵等。 二、测定项目 种子的发芽率POD）活性的测定， 丙二醛（MDA）含量的测定，脯氨酸（Pro）含量的测定，H2O2的含量的测定. 三、实验方法 1、种子发芽率的测定：取50粒吸胀的小麦种子→沿胚的中心线切成两半（严格区分两个半粒）其中50个半粒进行TTC染色（30℃水浴 20 min），另50个半粒进行曙红染色（室温染色10 min）→洗净后观察。 根据两种方法的染色情况，分别计算发芽率。 2、Pro含量的测定： （1）Pro的提取：分别取0.1 g实验组和对照组的幼苗→加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂→充分研磨→用2 mL 3% SSA洗研钵→5000 rpm离心10 min →量上清液体积。 （2) 测定：上清液各2 mL →分别加入 2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂→煮沸15 min→冷却后→5000 rpm离心10 min（若没沉淀可略此步骤） →分别测定A520。 (3）计算： 3、MDA含量的测定： （1）MDA提取：分别取0.1 g实验组和