生理学实验报告-蛙心灌流..doc

蛙类离体心脏灌流 一、【目的要求】 1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh)对离体心脏的影响 2、滴加0.65%NaCl溶液图 分析：滴加0.65%NaCl溶液后，心跳减弱，这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时，由于灌注液中缺乏Ca2+（），以致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。 滴加2%CaCl溶液 分析：细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用，称为膜屏障作用。[Ca2＋] 0增高时，Na＋内流受抑制，细胞0期除极速度与幅度减小，使兴奋性及传导性均降低。[Ca2＋] 0增高使Ca2＋内流增多，因此慢反应细胞0期去极化加快加强，传导性增高，而快反应细胞平台期缩短，有效不应期缩短，复极加速。Ca2＋内流增多，使心肌收缩能力增强。[Ca2＋] 0降低时，所引起的变化与高钙时相反。因此加入CaCl2后，心率减少、振幅减少，基线上移。 滴加1%KCl溶液 分析：滴加后的心搏曲线发现，曲线的频率逐渐减小，愈来愈疏，幅度逐渐下降，最后停止在基线处，即心脏停博于舒张状态 分析：上图可示，蛙心收缩减弱，心率减慢，最后出现蛙心停止舒张阶段。其机理为：乙酰胆碱与心肌细胞膜M受体结合，一方面提高心肌细胞膜K+通道的通透性，促使K+外流，将引起：1）窦房强细胞复极时K+外流增多，最大复极电位绝对值增大；Ik衰减过程减弱，自动除极速度减慢。这两方面因素导致窦房自律性降低，心率减慢。2）复极过程中K+外流增加，动作电位2、3期缩短，Ca2+进入细胞内减少，使心肌收缩减弱；另一方面乙酰胆碱可直接抑制Ca2+通道，减少Ca2+内流，进而使心肌收缩减弱。 滴加3%乳酸溶液 分析：H+与Ca2+的竞争机制，导致心肌细胞动作电位2期内流Ca2+减少，细胞质Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。 【注意事项】 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。 上述各实验项目，一旦出现作用应立即用正常任氏液换洗，以免心肌受损，而且必须待心搏恢复正常后方能进行下一步实验。 尽量选用健壮、体大的雄性蟾蜍，手术过程中注意保护心脏，避免损伤。 实验中及时用任氏液冲洗心脏，待曲线恢复平稳后再进行下一步操作。 每次更换任氏液都必须保持灌流液液面高度恒定，以免因灌流量变化而影响结果。 严格控制每次药品加入量，先加一滴，效果不明显再加一滴。 吸滴瓶中的任氏液和吸蛙心套管内溶液的吸管应区分专用，不可混淆使用，以免影响实验结果。 七、【讨论】 1. 离体蛙心制备好后，有时候馆内的液面上下移动很不明显，是何原因？如何处理？ 答：离体蛙心制备好后，蛙心插管内的液体应随蛙心室的收缩和舒张活动而上下移动。其实质是：在心室收缩时，心室容积减少，室内压升高，将心室内的液体压入插管内，管内液面上升；在心室舒张的时候，心室容积增大，心室内压减少，将插管内液体吸入心室，管内液面下降。 但是有时候蛙心插管内液面波动不明显，其主要原因是： ⑴ 插管内尖端出现血凝块。 ⑵ 插管尖端不在心室腔内，而是在心房或者脉间结缔组织等地方。 ⑶ 插管进入心室腔内过深，以致尖端抵住了心室壁。 ⑷ 蛙心由于长期心肌失血，导致活力下降。 2. 实验过程中，为什么必须保持蛙心插管内液面高度的恒定？液面过高或过低会产生怎样的影响？ 答：在实验过程中，蛙心插管内液面高度发生变化，心脏收缩曲线会相应发生变化。心肌缩短幅度和速度受到前负荷和后负荷的影响。插管液面高度所产生的压力，在心室舒张期末期相当于心肌的前负荷，心室开始收缩的时候，此液体所产生的压力又成为心肌收缩时的后负荷。故高度的改变，进而引起的前后负荷的改变将改变心肌收缩的幅度和频率。 当液面过高时。心缩曲线幅度将降低。因为过高的液面，将使心室前负荷超过了最适前负荷，将导致粗细肌丝过于疏远，而导致收缩的潜力减少，心肌收缩不再增加或下降。而类似的，过高的后负荷，也使心肌收缩的幅度和速度大大下降。而当液面过低时，心室收缩的幅度也会减少。因为前负荷过小，将导致粗细肌丝过于接近，而导致收缩的潜力减少，实际上，此时由于前负荷的减少导致心室收缩的效力的减少比前负荷增加而导致的还有明显。类似的，后负荷相应的减少也会导致心室收缩的减弱。所以，在实验中保持最适的液面高度。是取得较好实验结果的前提。 各种离子成分改变蛙心收缩的原理是什么？ 答：由于心肌细胞生物电活动和收缩过程与离子密切相关，因此，细胞外液中离子浓度升高或降低均会影响到心肌的电生理特性和收缩性。 钾离子的影响 K＋与静息电位的形成有关。细胞外液K＋浓度[K＋]0变化对心肌生理特性的影响较为复杂。高钾：[K＋]0轻度或中度增高时，膜内、外K＋浓度差减小，静息电位绝对值减小，