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实验一、二 邻二氮菲吸光光度法测定铁（条件实验和试样中铁含量的测定） 一、实验目的 1、掌握吸光光度法的基本原理及操作； 2、学习如何选择吸光光度法的实验条件； 3、掌握邻二氮菲测定铁的基本原理。 二、实验原理 在吸光光度法测量中，若被测组份本身有色，则不用显色剂即可直接测量；若被测组分本身无色或颜色很浅，则需用显色剂与其反应（即显色反应），生成有色化合物，再进行吸光度的测量。 大多数显色反应是络合反应，对显色反应的要求是： 1、灵敏度足够高，一般选择反应生成物的摩尔吸光系数ε大的显色反应以适于微量组份的测定； 2、选择性好，干扰少或容易消除； 3、生成的有色化合物组成恒定，化学性质稳定，与显色剂有较大的颜色区别。 在建立一个新的吸光光度法时，为了获得比较高的灵敏度和准确度，应以显色反应和测量条件两个方面，考虑下列因素： 1、研究被测离子、显色剂和有色化合物的吸收光谱，选择适合的测量波长； 2、溶液pH值对吸光度的影响； 3、显色剂的用量、显色时间、颜色的稳定性及温度对吸光度的影响； 4、被测离子符合朗伯—比尔定律的线性浓度范围； 5、干扰离子的影响及排除的方法； 6、参比溶液的选择。 此外，对方法的精密度和准确度，也需要进行实验。 铁的显色剂很多，如硫氰酸铵、巯基乙酸、磺基水杨酸钠和邻二氮菲等。其中，邻二氮菲是测定微量铁的一种较好的试剂，它与二价铁离子反应，生成稳定的橙红色络合物 （LgK稳定=21.3） Fe2++3phen==[Fe(phen)3]2+ 此反应很灵敏，络合物的摩尔吸光系数为：ε=1.1104 L / mol.cm 。在pH=2～9之间，颜色深度与酸度无关，而且很稳定，在有还原剂存在的条件下，颜色的深度可以维持几个月不变。本方法的选择性很高，干扰很少,相当于铁含量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Cu2+等均不干扰测定，所以此方法应用很广。 三、仪器与试剂 1、仪器 IS—7220或IS—722型分光光度计 比色管（50mL20个） 移液管（1mL2支；2mL1支；5mL1支） 滴定管（50mL1支） 量筒（10mL1个） 2、试剂 （1）铁标准溶液100 μg/mL：准确称取0.8634g NH4Fe（SO4）2 置于大烧杯中，加入20mL 6 mol/L HCl溶液和少量的水。溶解后，转移至1L比色管中，用水稀释至刻度，摇匀。 （2）盐酸羟胺溶液 10%（用时配制） （3）邻二氮菲溶液 0.15%（用时配制）：应先用少量酒精溶解，再用水稀释。 （4）醋酸钠溶液 1M （5）氢氧化钠溶液 0.1M （6）精密pH试纸 四、实验步骤 1、绘制吸收曲线并选择测量波长 取两个50mL的比色管，分别加入0.0 mL和0.60 mL的100μg/mL铁标准溶液。然后，在这两个比色管中各加入1mL 10%盐酸羟胺溶液，2mL 0.15%邻二氮菲及5mL 1M醋酸钠溶液，用水稀释至刻度，摇匀,放置10min 。 在7220型分光光度计上，用1mL比色皿，以试剂空白(即不含铁标准溶液的样品)作参比溶液，在波长450～540nm间，先每隔10nm测量一次吸光度，然后在最大吸光度所对应的波长附近每间隔5nm再进行吸光度测量，最后以波长为横坐标、吸光度A为纵坐标绘制A～曲线。在A～曲线上选择具有最大吸光度值所对应的波长作为本实验的测量波长（实验时,分光光度计的波长选择旋钮调到此值）。 2、有色溶液稳定性的试验 取50mL比色管一个，加入0.60mL100μg/mL的铁标准溶液，再加入1mL10%盐酸羟胺溶液、5mL1M醋酸钠溶液、约40mL蒸馏水，最后加入2mL0.15%邻二氮菲溶液，并记下此时的时间，迅速摇匀。取适量于1mL比色皿，以试剂空白(即不含铁标准溶液的样品)作参比溶液，立即在上面步骤所选的波长条件下进行测定，读得吸光度，并记下读得吸光度的时间，以后每隔1、2、3、5、10、30、60、120、180分钟测定各测定一次。所得数据以时间为横坐标、吸光度A为纵坐标绘制A～曲线，并选择最佳的测定时间。 3、显色剂用量的确定 取十个50mL比色管，每个比色管都加入100μg/mL的铁标准溶液、0.60mL10%的盐酸羟胺1mL，然后分别加入0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.50、2.50、4.00mL的邻二氮菲溶液，最后都加入5mL1M醋酸钠溶液，定容至刻度，摇匀。以不含显色剂的溶液溶液，使用1mL比色皿，以试剂空白(即不含铁标准溶液的样品)作参比溶液,在选定的波长下分别测量其吸光度。以显色剂浓度C为横坐标、吸光度A为纵坐标绘制A～C曲