3高效液相色谱教材.ppt

（2）荧光检测器(fluorescence detector, FLD) 什么是荧光? 化合物受到入射光的照射后，吸收辐射能，发出比吸收波长长的特征辐射。当入射光停止照射时，特征辐射很快消失，这种辐射光线就是荧光。 被化合物吸收的光称为激发光，产生的荧光称为发射光。 荧光检测器定量基础 利用测量化合物荧光强度对化合物进行检测的液相色谱检测器就是荧光检测器。 F=2.303KQI0?bc F-荧光强度，K-荧光收集效率，I0-入射光强度， ?-摩尔吸收系数，b-吸收池厚度，c-荧光物质溶液浓度 其他条件不变下，荧光强度与荧光物质溶液浓度成正比—荧光检测器的定量基础。 荧光检测器的特点 灵敏度高。其灵敏度比紫外-可见检测器的灵敏度高两个数量级，最小检测限可达10-12g/mL。特别适合痕量分析。 良好的选择性。如，检测牛奶中维生素B2，紫外-可见光检测（265nm下）时存在基体干扰峰；荧光检测（激发波长265nm，发射波长520nm），基体成分不干扰检测。 线性范围较宽。约为103-104，比紫外吸收检测器窄，但对大多数痕量分析已经足够宽。 不是通用型检测器。 荧光检测器的应用 多环芳烃能产生荧光，荧光检测法可用来测定水、空气、土壤等环境样品中的多环芳烃。 维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物 药物、氨基酸、胺类等 不发射荧光的物质可通过化学衍生为发射荧光的物质 HPLC定量分析方法 痕量分析-用峰高定量 一般大多数分析-用峰面积定量 峰面积归一化法：使用前提是假设每一种组分的响应因子完全相同，对紫外检测不可能，因为不同化合物摩尔吸收系数不同。因此，在HPLC中该方法使用不多。 外标法：绘制峰面积-标样浓度的校正曲线。使用最普遍。 §3-7 高效液相色谱法分离类型的选择 相对分子量较低，挥发性较高的试样——气相色谱法 相对分子质量200-2000——液固、液液、离子交换、离子对、离子色谱 相对分子质量大于2000——空间排阻色谱 溶于水的试样——反相色谱法 溶于酸性或碱性水溶液——离子交换色谱法、离子对色谱法、离子色谱法 非水溶性试样： 溶于烃类（苯或异辛烷）——液固吸附色谱 溶于二氯甲烷或氯仿——正相色谱和吸附色谱 溶于甲醇——反相色谱 异构体——吸附色谱 同系物——正相、反相色谱 适合：高沸点、热稳定性差、生理活性、相对分子量大的物质 应用： 化学，生化，医学，工业，农业，环保，商检，法检 环境中的多环芳烃、除莠剂、杀虫剂等都可以用高效液相色谱法进行快速、灵敏的分析测定。大气飘尘的多环芳烃从两环的萘至五环的苯并(a)芘等10多种化合物，在半小时内便可分离测定。 §3-8 高效液相色谱法应用 高效液相色谱法测定卷烟主流烟气中的多环芳烃 Agilent 1100高效液相色谱仪，G1321A荧光检测器(美国Agilent公司)；Intertsil ODS C18色谱柱 (4.6?250 mm, 5 ?m) 流动相：甲醇-水(体积比为4：6，A)，100％甲醇(B)，梯度洗脱，0～20 min保持A液100％，20～60 min线性变为B液100％，流速0．5 mL／min；柱温40 ?C；自动进样，进样体积6 ?L；荧光检测器激发波长 256 nm，发射波长 441 nm HPLC-柱后衍生化-荧光检测地表水中氨基甲酸酯类农药 色谱条件: 色谱柱: Carbamate专用柱，4.6 mm ?150 mm; 柱温30℃ ；流动相：水／乙腈／甲醇梯度淋洗，流速1.5 mL／min；荧光检测器：发射波长445 nm，激发波长339nm 100 μg／L氨基甲醯酯的标准高效液相色谱峰 高效液相色谱-二极管阵列检测器测定化妆品中的6种酞酸酯 HPLC-DAD条件：Zorbax Eclipse XDB-C8，150×4.6 mm ID, 5 ?m色谱柱；流动相：初始甲醇-水 体积比为70：30，保持5 min，15 min内升至100％甲醇，保持5 rain；1.0 mL／min流速；选择保存波长 190 400 nin紫外光谱图。 高效液相色谱法同时测定食品中对位红和苏丹色素等8种脂溶性染料 色谱柱：Zorbax 80A Extend-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流速：0.8 mL／min；进样量：10μL；流动相：0.1％ 甲酸水溶液(A)和0．1％甲酸乙腈溶液(B)；梯度洗脱程序：0～20 min B由70％～95％ ，20～30 min B由95％～100％ ，保持5 min，35.1 min变为30％ A和70％ B，保持5 min。 思考题 从分离原理、仪器构造及应用范围上简要比较气相色谱及液相色谱的异同点。 解：二者都是根据样品组分与流动