生物、化学-常用试剂配制选编.doc

常规试剂配制和测定方法 一、 溶液的配制 1. Mandels营养盐溶液（1000 mL） 名 称 重 量（g） 硫酸铵（(NH4)2SO4） 14 磷酸二氢钾（KH2PO4） 20 尿素 （H2NCONH2） 3 硫酸镁（MgSO4·7H2O） 3 氯化钙（CaCl2·2H2O） 4 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 2. Mandels微量元素溶液（1000 mL） 名 称 重 量（g） 氯化钴（CoCl2·6H2O） 3.7 硫酸锌（ZnSO4·7H2O） 1.4 硫酸锰（MnSO4·H2O） 1.6 硫酸亚铁（FeSO4·7H2O） 5.0 注：用煮沸10 min后的蒸馏水配制。 3. DNS试剂的配制（1000 mL） （1） 取：3,5-二硝基水杨酸 （C7H4N2O7） 7.5 g 氢氧化钠 （NaOH ） 14.0 g 充分溶解于1000 mL 水中（水预先煮沸10 min） （2） 加入：酒石酸钾钠 （C4H4O6KNa·4H2O） 216.0 g 苯酚（在50 ℃水浴中融化） 5.5 mL 偏重亚硫酸钠 （Na2S2O5） 6.0 g （3） 充分溶解后盛于棕色瓶中，放置5天后便可使用，平时盛一小瓶(250 mL)使用，要放在冰箱中冷藏。此溶液每月配制一次。 注意：倒入瓶中时要尽量装满！！ 4. 考马斯亮蓝G-250的配制（1000 mL） 称考马斯亮蓝G-250 100 mg即0.1g溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85 %磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL ，滤纸过滤。最终试剂中含0.01 %（w/v）考马斯亮蓝G-250，4.7 %（w/v）乙醇，8.5 %（w/v）磷酸。 5. 1.0 M柠檬酸缓冲溶液的配制（1000 mL） 名 称 分 子 量Mn 重 量(g) 柠檬酸（C6H8O7·H2O） 210 210 NaOH 40 74.5 准确称取柠檬酸210 g，溶于约750 mL煮沸（10 min）蒸馏水中，待柠檬酸充分溶解后加入氢氧化钠74.5 g，完全溶解后将上述溶液转移到1000 mL容量瓶中，冷却后将容量瓶定容到1000 mL（原始pH4.45）。（检验方法：取1M柠檬酸缓冲溶液稀释20倍，测定稀释液的pH值，pH值应为4.8）6. 标准糖溶液的配制和标准方程的测定 （1） 标准糖溶液的配制 准确称取2.000 g葡萄糖/木糖（葡萄糖/木糖需105 ℃烘干3），蒸馏水溶解，全部转移至1 L容量瓶内，摇匀，配制成2 g/L葡萄糖/木糖溶液。 取9个100 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖/木糖溶液10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL依次加入容量瓶，蒸馏水定容，摇匀。即为0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液。 取6个30 mL容量瓶、1支20 mL刻度吸管，分别吸取2 g/L葡萄糖溶液10 mL、12 mL、14 mL、16 mL、18 mL、20 mL依次加入容量瓶，每瓶再加入1.5 mL柠檬酸缓冲液，蒸馏水定容，摇匀。即为1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解葡萄糖 （2） 标准方程的测定： ① 葡萄糖/木糖标准方程的测定 取10支25mL刻度管，10支1mL刻度吸管，分别加入0.2 g/L、0.4 g/L、0.6 g/L、0.8 g/L、1.0 g/L、1.2 g/L、1.4 g/L、1.6 g/L、1.8 g/L、2.0 g/L葡萄糖/木糖标准溶液1 mL，DNS溶液3 mL。100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸馏水作为空白对照，550 nm测定吸光度A。以A为纵坐标，C为横坐标，制定标准曲线。（7230型分光光度计输出方程为A = MC + N，723型分光光度计输出方程为C = KA + B） ② 酶解木糖标准方程测定（测定木聚糖酶活力） 取6支25 mL刻度管，6支2 mL刻度吸管，分别加入1.0 g、1.2 g、1.4 g、1.6 g、1.8 g、2.0 g酶解木糖标准溶液1.5 mL，DNS溶液3 mL，100 ℃煮沸5 min，水浴冷却后定容至25 mL，摇匀。以蒸