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生物分离工程 王振宇 第一章 概述 现代生物技术主要包括发酵技术、细胞培养技术、酶工程、基因工程、蛋白质工程以及分离纯化工程，其中分离纯化技术(separation and purification)是现代生物技术的核心，是决定产品的安全、效力、收率和成本的技术基础。 一.分离纯化技术的重要性 分离纯化技术是现代生物技术的核心，这主要与生物产品的特点有关： 。 纯化工艺设计时要注意以下原则: 。 生物分离工程的发展趋势 1．分离纯化理论的研究 溶液中目标产物与添加物的反应机理，研制高选择性的分离剂； 生化分离过程中动力学基础理论的研究 分离过程数学模型的建立。 2．开发新型高效分离纯化技术 采用多种分离纯化技术结合，特别是多种技术联用的方法 生物技术的下游工程与上游工程结合。 ③改进上游因素，简化下游加工过程。 控制培养基及发酵条件。 生物催化剂的研制。 生物分离工程的发展趋势 溶液中目标产物与添加物的反应机理，研制高选择性的分离剂； 生化分离过程中动力学基础理论的研究 分离过程数学模型的建立。 采用多种分离纯化技术结合，特别是多种技术联用的方法 生物技术的下游工程与上游工程结合。 ③改进上游因素，简化下游加工过程。 控制培养基及发酵条件。 生物催化剂的研制。 第二章 细胞的破碎与分离 第一节 概述 细胞破碎（cell rupture）技术是利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内含物释放出来的技术。 由动、植物及微生物生产的天然产物，有胞外型和胞内型二种，为收回胞内产物，必须先将它们从胞内释放到周围环境中去，然后再进行分离纯化。 特别是DNA重组产品，结构复杂，必须在细胞内组装，获得生物活性，如果被分泌到细胞外，其生物活性就有改变。所以细胞破碎技术就显得非常重要，方法得当，能使活性物质有效的释放出来，方法不得当，使活性物质失活。 选择什么样的细胞破碎工艺，主要考虑以下因素： 1)承受剪切力的能力 2)耐酸碱能力 3)耐温度的能力 机械破碎法： 1)高压匀浆破碎法 2)高搅拌珠研磨法 3)超声波破碎法 非机械破碎法： 1)渗透压冲击破碎法 2)冻融破碎法 3)酶解破碎法 4)化学破碎法 利用高压迫使细胞悬液高速通过针型，经过突然减压和高速冲击撞击迫使细胞破碎。 高压匀浆器是由高压泵、针型阀组成。 细胞悬液通过单向阀进入泵体后，高压压迫下进入针型阀小孔中，通过猛烈撞击阀杆，以高速冲击在撞击壁上，使细胞破碎，然后流向低压区，通过阀门时会产生高剪切力。 APV 高压匀浆器针型阀结构简图 1.操作压力 2.破碎次数 3.阀型设计 4.温度 5.细胞浓度 细胞破碎程度一般用蛋白质释放量来确定。 细胞破碎率与温度、压力和破碎次数遵循一般动力学定律（Doulach） Ln(1-R)= ?KNPa R——破碎率，蛋白质释放量Rn与最大释放量之比 a——与微生物有关的常数 K——机械速度常数 N——破碎次数 P——操作压力 第三节 高速搅拌珠研磨破碎法 高速搅拌珠研磨破碎法: 把玻璃球与细胞一起高速搅拌，带动玻璃球撞击细胞，作用于细胞壁的碰撞作用和剪切力使细胞破碎。 1、 分批破碎 2、 连续破碎 ln(1-R)=?KT R——破碎率 T——破碎时间 K——速率常数 : ①仓体设计 ②搅拌盘设计 ③搅拌速度 ④研磨珠大小 ⑤研磨珠装置 ⑥细胞浓度 ⑦进料速度 ⑧温度 ⑨待破碎细胞的种类 ⑴垂直仓的研磨介质载量为50%-60%，可以减少珠的磨损，但效率低； ⑵水平仓的研磨介质装载量为80%-85%，研磨效率高，但磨损大。 主要是给研磨珠的推动力，搅拌盘与驱动轴有同心的，也有偏