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蛋白质工程部分 一、名词解释： 蛋白质工程：是基于对蛋白质结构和功能关系的认识，进行分子设计，通过基因工程途径定向地改造蛋白质或创造合乎人类需要的新的突变蛋白质的理论及实践，是基因工程基础上的延伸，是第二代基因工程。 structure motif：结构模体。介于蛋白质二级结构和三级结构之间的空间结构,指相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，排列形成规则的、在空间结构上能够辨认的二级结构组合体，并充当三级结构的构件（block building），其基本形式有αα、βαβ和βββ等。 折叠病：蛋白质分子的氨基酸序列没有改变，只是其结构或者说构象有所改变引起的疾病。如老年性痴呆症、帕金森氏症以及某些肿瘤。 嵌合抗体：用DNA重组技术将鼠源单抗的可变区(V区)基因与人免疫球蛋白(Ig)的恒定区(C区 )基因相连接,构建成嵌合基因,导入宿主细胞进行表达,制成嵌合抗体。目前国内外已制备了数十种嵌合抗体。 Proteome：蛋白质组。指处于一定发育阶段的有机体、组织、细胞或亚细胞结构在一定的条件下所表达出的全部蛋白质群体。 Mass Spectrometry：质谱技术。是将被测物质离子化，离子在磁场或电场中运动的轨迹和速度依离子的质荷比（M/Z）的不同而变化，从而可以据其差别来判断离子的质量及特性。 Peptide mass fingerprinting: 肽质量指纹谱,指蛋白质或肽被特异性的酶切后再用质谱进行肽混合物质量测定，会得到一套具有特征性的肽质量图谱，由于其具有特征性,所以称为指纹谱。通过与数据库中所有的蛋白质的理论酶解的肽质量相匹配来鉴定蛋白质。 二、单项选择题 1. 蛋白质工程的基本原理是（ C ） A 中心法则 B 热力学第二定律 C 中心法则的逆推 D 模型对比 2. 下列不属于蛋白质结构测定的技术是（ D ） A X射线晶体衍射技术 B 核磁共振波谱技术 C 生物信息学预测蛋白质结构 D 缺失突变技术 3. 通过增加内氢键数目可以改善蛋白质设计的哪项目标（ A ） A 热稳定性 B对氧化的稳定性 C对重金属的稳定性 D pH稳定性 4. “分子病”是由于基因突变造成蛋白质分子中仅仅一个氨基酸残基的变化就引起的疾病。 下列不属于分子病的是（ D ） A 地中海镰刀状红血球贫血症 B 血友病 C 苯丙酮尿症 D 老年性痴呆症 5. 蛋白质微阵列( Protein micro-array) ，将大量蛋白质有规则的固定在某种介质载体上，利用蛋白质与蛋白质、酶与底物、蛋白质与其他小分子之间相互作用检测分析蛋白质 的技术称为（ A ） A 蛋白质芯片技术 B 蛋白质分子印迹技术 C表面等离子体共振技术 D酶联免疫吸附剂测定 三、填空题 1．维持蛋白质一级结构的作用力是（ 肽键 ）。 2．蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础，通过有控制的（修饰）和（合成），对（现有蛋白质）加以定向改造，设计、构建并最终生产出 性能比自然界存在的蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。 3. 常用的蛋白表达系统有（ 大肠杆菌表达系统 ）、（ 酵母表达系统 ）、（哺乳动 物细胞表达系统）和（昆虫细胞表达系统） 。 4. 核磁共振（NMR）的优点是可以在 （ 水溶液或有机相 ）中研究生物大分子结构， 研究溶液条件的改变对生物大分子三维结构的影响以及生物大分子内部动力学的特 点。 5. 蛋白质分离纯化方法中根据分子大小的纯化方法有（ 透析和超滤 ），（ 密度梯度离 心）和（ 凝胶层析 ）。 6. 不同的蛋白质具有不同的等电点，利用（ 蛋白质在等电点时溶解度最低 ）的原 理，可以把蛋白质混合物分开。 四、简单题 1. 目前有哪些蛋白质工程分子改造的常用方法？ 答：⒈ 基因定点突变技术（小改）：即通过在DNA水平上进行碱基的取代、插入或缺失，达到改变基因，从而改变编码的蛋白质的结构的技术，包括核苷酸引物诱变，盒式诱变，PCR诱变，随机诱变。⒉ 基因剪切和融合（中改）：原理：将编码某蛋白的部分基因移植到另种蛋白基因上，经克隆、表达，产生新的融合蛋白。可达到使蛋白易于表达、纯化、细胞定位等，或使蛋白性质改变。⒊ 基因全合成（大改）：合成DNA，然后表达出相应蛋白。可以全部由人工控制，便于设计和改造，还适用于同时实现多处突变。 2. 蛋白质工程中增加蛋白