分子生物学实验报告剖析.doc

分子生物学实验报告 姓 名： 学 院： 专业班级： 学 号： 一、前期工作及引物设计 （一）实验目的： 寻找一个合适的基因，并设计出与之相对应的引物，用于后续实验。 （二）实验原理： 引物设计的一般原则： ① 引物长度：15-30bp ② GC含量：一般引物序列中G+C含量一般为40%~60% ③ 退火温度：退火温度需要比解链温度低5℃，如果引物碱基数较少，可以适当提高退火温度，这样可以使PCR的特异性增加 ④ 避免扩增模板的二级结构区域 ⑤ 与靶DNA的错配：当被扩增的靶DNA序列较大的时候，一个引物就有可能与靶DNA的多个地方结合，造成结果中有多个条带出现。这个时候有必要先使用BLAST软件进行检测 ⑥ 引物末端：引物3’端是延伸开始的地方，因此要防止错配就从这里开始。3’端不应超过3个连续的G或C，因这样会使引物在G+C富集序列区错误引发。 ⑦ 引物的二级结构：引物自身不应存在互补序列，否则引物自身会折叠成发夹状结构，这种二级结构会因空间位阻而影响引物与模板的复性结合。 （三）操作方法： 1、阅读一些与小麦抗旱基因相关的文章，并最终选出基因TAP