养血定颤方对帕金森病大鼠行为学、多巴胺能神经元和自由基损伤的影响.docVIP

养血定颤方对帕金森病大鼠行为学、多巴胺能神经元和自由基损伤的影响 【摘要】nbsp; 目的：探讨养血定颤方治疗帕金森病的作用及机制。方法：采用6羟基多巴胺单点注射法制备帕金森病大鼠模型,考察养血定颤方对模型大鼠平均转速、TH阳性细胞数和自由基损伤的影响。结果：养血定颤方能显著降低平均转速，增加黑质TH阳性细胞，降低MDA水平,提高SOD、GSH水平。结论：养血定颤方能改善帕金森病大鼠旋转行为，保护受损神经元，其机制与减少自由基损伤有关。 【关键词】nbsp; 帕金森病 行为学 多巴胺能神经元 自由基损伤 养血定颤方 　帕金森病是一种常见的中枢神经系统变性性疾病，其病理特征是中脑黑质致密部多巴胺能神经元变性缺失。多巴替代疗法虽能改善临床症状，但长期应用会出现“开—关”现象、运动及精神障碍等副作用,且仍无法延缓多巴胺能神经元进行性缺失［1］，因此寻求新的有效治疗手段具有重要意义。养血定颤方系导师张伯礼教授所创新方，治疗帕金森病有较好疗效，本研究旨在观察该方对帕金森病大鼠行为学、受损神经元和自由基损伤的影响，为临床进一步应用提供科学依据。 　　1nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 材料与方法 　　1.nbsp;nbsp; 1nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 材料nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 实验动物Wistar雄性大鼠，体重280～320 g，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证编号SCXK(京)20022003。药物：6羟基多巴胺、阿朴吗啡、antiTH(Sigma公司)，美多芭(上海罗氏制药有限公司)，养血定颤方(自制)，MDA、SOD、GSH试剂盒(南京建成生物工程研究所)。仪器：江湾II型立体定位仪(第二军医大学)，微量进样器(安亭微量进样器厂)，病理图文分析系统(千屏影像工程公司)。 　　1.nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 方法nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 模型药物配制:以0.nbsp;nbsp; 01%VC溶液配制3 μg/μL 6羟基多巴胺，避光冷藏；模型制备Wistar大鼠45只，禁食12 h，麻醉，消毒，开皮，暴露前囟，固定大鼠，依据大鼠脑立体定位图谱［2］，确定坐标(1.nbsp;nbsp; 0 mm，-2.nbsp;nbsp; 7 mm, -5.nbsp;nbsp; 2 mm)与(1.nbsp;nbsp; 0 mm，-2.nbsp;nbsp; 7 mm,-6.nbsp;nbsp; 0 mm)，打孔，每点注射5 μL造模药物，留针10 min，退针，缝合。另取大鼠15只,同法操作，注射等体积0.nbsp;nbsp; 01%VC溶液。模型筛选：术后3周，腹腔注射阿朴吗啡0.nbsp;nbsp; 5nbsp; mg/kg诱导旋转，40 min平均转速＞7转/min为模型成功大鼠。分组与给药：取模型成功大鼠,随机分为3组，即养血定颤方组、美多芭组和模型组，注射VC溶液大鼠为正常组。4组分别灌胃给予养血定颤方(相当于生药16.nbsp;nbsp; 4 g/kg·d)、美多芭(125 mg/kg·d)和生理盐水(正常组和模型组，3 mL/d)，连续4周。平均转速:第7周注射阿朴吗啡诱导旋转，记录40 min平均转速。TH免疫组化：第8周每组取6只大鼠，麻醉，以4%多聚甲醛溶液灌注固定大鼠，取脑，石蜡埋块，切片。常规SABC免疫组化染色(antiTH稀释比1∶100)。摄片。黑质毁损侧TH阳性细胞计数。自由基损伤：第8周每组取6只大鼠，断头，冰上分离黑质，称重，以冷生理盐水制成匀浆液(质量体积比1∶9)，低温离取上清，考马斯亮兰法测定蛋白含量。按说明书测定MDA、GSH含量和SOD活性。 nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 　　统计学处理：所有描述性参数以均数±标准差表示，组间比较采用方差分析。用SPSS 13.nbsp;nbsp; 0软件包进行分析，Plt;0.nbsp;nbsp; 05为差异有显著性。 　　2nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 实验结果 　　2.nbsp;nbsp; 1nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 各组大鼠平均转速比较nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 见表1。 　　表1nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 各组大鼠平均转速比较（略） 　　注：与模型组比较##Plt;0.nbsp;nbsp; 01 　　2.nbsp;nbsp; 2nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; TH免疫组化染色nbsp;nbsp;nbsp;nbsp; 镜下可见棕色阳性物位于胞浆及突起，正常