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2.7.5 核酸的变性、复性与杂交 denature 核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。 不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性核酸将失去其部分或全部的生物活性。 引起核酸变性的因素:温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 变性（denaturation） 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * * 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid 核酸的变性： 双螺旋区氢键断裂，空间结构破坏，形成单链无规则线团状态的过程。 DNA变性的特点 结构变化：氢键断裂，不涉及磷酸二酯键的断裂。 突变性及熔点：一定温度，260nm吸光值骤增；将紫外吸收的增加量达到最大增量一半时的温度值称溶解温度（热变性及熔解温度 新P92，旧P62） 影响因素：DNA自身的（G + C）%，离子类型与强度、溶液pH、变性剂（甲酰胺、尿素、甲醛） 检 测：紫外吸收的增色效应。 核酸变性，260nm吸收剧增。 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * Effects of DNA chain-pair and (G+C)% on the denaturation 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 复性（Renaturation） 变性DNA的互补链在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构的过程。（复性的概念） DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 变性核酸复性时需缓慢冷却，称为退火。 DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关：将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性； DNA的复性的速度与它本身的组成和结构有关：分子量？DNA浓度？G+C？重复序列？离子强度（消除负电荷）？ 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 杂交（Hybridization） 热变性的DNA单链，在降温复性时可与同源DNA互补链重新形成双螺旋结构。它也可以与在某些区域有互补序列的异源 DNA单链形成双螺旋结构。 DNA 单链与互补的 RNA 链之间也可以发生杂交。可通过调节复性温度、时间、离子强度、pH值等条件来控制杂交的选择性。 核酸的杂交在分子生物学和遗传学的研究中具有重要意义：Southern / Northern hybridization 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * 2.8 核酸的合成 体内合成和体外合成的条件：dNTP(A\G\T\C)，DNA（或RNA）polymerase，Model（DNA或RNA），Primers, buffer（较稳定的pH环境), Mg2+ 等。 体内合成：DNA复制 固相合成技术：亚磷酸三酯法 人工体外合成：1985，K. Mullis, the 1993 Nobel Prize。 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * PCR原理示意图 * 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid PCR扩增动画 * 2.9 核酸的一级结构测定 sequencing technique advance： DNA酶法测序： Sanger 1975；加减法发展至终止法。间接法 化学测序法：Maxam Gilbert 1977。直接法 PCR 测序法：Sanger法 + K.Mullis, Saiki + Taq DNA polymerase　 Sequencing of RNA: RNA-cDNA-Sequencing 生物化学　　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　nucleic acid * DNA测序动画 * 下一章： 第三章　糖类 * 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰