第讲DNA的复制和修复.pptVIP

1.转座子的分类和结构特征 a. 简单转座子??? 转座子（transposon，Tn）是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位。??? 最简单的转座子不含有任何宿主基因而常被称为插入序列（insertion sequence，IS）。 IS是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。一个细菌细胞常带有少于10个IS序列。转座子常常被定位到特定的基因中，造成该基因突变。IS序列都是可以独立存在的单元，带有介导自身移动的蛋白。 b.复合式转座子（composite transposon） 是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某个功能基因两端时就可能产生复合转座子。 一旦形成复合转座子，IS序列就不能再单独移动，因为它们的功能被修饰了，只能作为复合体移动。 没有IS序列的、体积庞大的转座子（5000bp以上）——TnA家族。 这类转座子带有3个基因，其中1个是β－内酰胺酶（AmpR），另外两个则是转座必需的。 mRNA 靶位点复制 靶位点复制 左倒转重复序列 （38bp） 右倒转重复序列 （38bp） 转座子TnA的结构示意图 转座酶 解离酶 β -内酰胺酶 2.真核生物中的转座子 （1）玉米中的控制因子 自主性因子：具有自主剪接和转座的功能 非自主性因子：单独存在时是稳定的，不能转座，当基因组中存在与非自主性因子同家族的自主性因子时，它才具备转座功能，成为与自主性因子相同的转座子。 a. Ac-Ds系统 Ac长4563bp，转录生成单一RNA，其产物为转座酶。 Ds属于非自主性因子，又称解离因子，与Ac属于同一家族的控制因子。已知所有Ds都是Ac转座子的缺失突变体，失去转座酶功能。当Ac因子存在时，能活化Ds，使其在基因组内转座或插入结构基因之内，导致基因失活或改变结构基因的表达水平，也可使染色体特定部位断裂，引起缺失或重组。 ORF1 ORF2 CACTACAAGAAAA TTTTCTTGTAGTG 外显子1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 b. Spm-dSpm系统 即抑制－促进－增变系统 Spm：是自主性因子，其转录区（即tnpA基因）有8300bp，成熟mRNA为2500个碱基，编码了含621个氨基酸、能与转座子近末端区12bp多拷贝保守序列相结合的蛋白质。 dSpm：都是功能性Spm的缺失突变体。 转录 （2）果蝇的转座子——P转座子 果蝇的杂种不育都是由于P转座子插入基因组W位点而引起的。所有P转座子两翼都有31碱基倒置重复序列，P转座子转座导致靶DNA复制产生8碱基正向重复序列。 外显子0 1 2 3 阻遏转座 转座酶 P转座子 短mRNA长mRNA 体细胞内 卵细胞内 果蝇转座子对后代不育性的影响分析 6.6×104 6.6×104 8.7×104 P 雄 × P 雌 雄性染色体P转座子 雌性染色体P转座子 细胞质类型生成物 P 雄 × M 雌 雄性染色体P转座子 雌性染色体无P转座子 细胞质类型无阻遏物 M 雄 × P 雌 雄性染色体无P转座子 雌性染色体P转座子 细胞质类型生成阻遏物 无转座，后代可育 转座，杂种后代败育 无转座，后代可育 P转座子与杂种不育 3、转座作用的机制 ? 转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的（3-12bp）、被称为靶序列的DNA会被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。不同转座子的靶序列长度不同，但对于一个特定的转座子来说，它所复制的靶序列长度都是一样的，如IS1两翼总有9个碱基对的靶序列，而Tn3两端总有5bp的靶序列。 转座可被分为复制性和非复制性两大类。 在复制性转座中，所移动和转位的是原转座子的拷贝。转座酶（transposase）和解离酶（resolvase）分别作用于原始转座子和复制转座子。TnA类转座主要是这种形式。 在非复制性转座中，原始转座子作为一个可移动的实体直接被移位，IS序列、Mu及Tn5等都以这种方式进行转座。 4.转座作用的遗传学效应 ① 转座引起插入突变; ② 转座产生新的基因; ③ 转座产生的染色体畸变; ④ 转座引起的生物进化。 人