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(二)比较吸收光谱特征性常数的一致性 例如:丙酸睾丸素和甲基睾丸酮在无水乙醇中的最大吸收波长λmax相同,都是240nm,但在该波长处的不同,前者为460,后者为540,据此可加以区别。 λmax和峰值吸光系数或εmax是最常用于定性鉴别的吸收光谱的特征性常数,若一个化合物有几个吸收峰,并存在谷和肩峰,应该同时作为鉴定依据,从而显示光谱特征的全面性。 定性分析方法 (三)比较吸光度(或吸光系数)比值的一致性 例如:维生素B12的吸收光谱有三个吸收峰,分别在278nm、361nm、550nm波长处。中国药典(2010版)规定用下列比值进行鉴定: = 1.70~1.88 = 3.15~3.45 若样品吸收峰与标准品相同,吸光度或吸光系数的比值也在上述范围之内,则可认为样品即为维生素B12。 定性分析方法 二、纯度检查 (一)杂质检查 (二)杂质限量检查 肾上腺素中肾上腺酮的检查: 在310nm处,肾上腺酮有吸收峰,而肾上腺素没有吸收。可利用λmax= 310nm检测肾上腺酮的混入量。该法是将肾上腺素样品,用0.05mol/L HCl溶液制成每lml含2mg的溶液,在lcm吸收池中,于310nm处测其吸光度A值。规定A值不得超过0.05。 三、定量分析方法 (一)吸光系数法 例:维生素B12的水溶液在361nm处的为207,现将其盛于2cm的吸收池中,测得溶液的吸光度是0.621,计算溶液的浓度。 (二)标准对照法 标准对照法简称对照法,又称比较法。在测定时,按照各品种项下规定的方法,在相同条件下配制样品溶液和标准品溶液,在规定波长处测其吸光度A样和A标 。因为是同种物质,在同一波长下,用同一厚度的吸收池在同一台仪器上进行测量,所以吸光系数相同,即ε样 = ε标 ;液层厚度相同,即L样 = L标 。 ~ 定量分析方法 (三)标准曲线法 标准曲线法又称工作曲线法、校正曲线法,测定时,先取与被测物质含有相同组分的标准品,配制成一系列不同浓度的标准溶液,测定标准系列的吸光度,以浓度为横坐标,相应的吸光度为纵坐标绘制A-c曲线,如图所示。然后在完全相同的条件下测量样品溶液的吸光度,从标准曲线上查出与此吸光度相对应的样品溶液的浓度。 定量分析方法 参考资料 《基础化学》 陆家政、傅春华主编 人民卫生出版社 2008年 《分析化学》 谢庆娟主编 人民卫生出版社 2008年 《无机及分析化学》 黄月君主编 华中科技大学出版社 2010年 《分析化学》 席先蓉主编 中国中医药出版社 2006年 学习小结 一、学习内容 紫外-可见分光光度法 基本原理 吸收光谱 吸收系数 朗伯-比尔定律 A –λ曲线 A=kcL 摩尔吸光系数、百分吸光系数 定性定量方法 定性方法 纯度检查 标准曲线法、标准对照法、吸光系数法 定量方法 比较吸收光谱、特征性常数、吸光度比值的一致性 杂质检查、杂质限量检查 二、学习方法 1.在学习本章前,应仔细阅读教学大纲,了解本章的任务,阅读大纲中关于该章的知识点,注意对各知识点的能力层次要求。认真研究本章的学习目标,了解学习目的、知识要求、能力要求,以便在阅读教材时做到心中有数、有的放矢,使以后的学习能紧紧围绕本章的基本要求。 2. 紫外-可见分光光度法既可以进行定性分析,也可以进行定量分析,所以就要学习定性、定量的依据,掌握定性分析的依据—吸收光谱曲线,定量分析的依据—光的吸收定律,并掌握其应用范围。在此基础之上,再学习定性、定量分析的方法,掌握定性分析分为定性鉴别、纯度检测,并清楚其检测方法;定量分析掌握标准曲线法、标准对照法、吸光系数法。 * 基础化学 第2版 第十章 紫外-可见分光光度法 第十章 紫外-可见分光光度法 第一节 概述 第二节 紫外-可见分光光度法的基本原理 第三节 紫外-可见分光光度计 第四节 定性和定量分析方法 1.电磁辐射与电磁波谱、物质对光的选择性吸收等基础知识。 2.紫外-可见分光光度法的基本原理。 3.紫外-可见分光光度计的主要部件、仪器类型、测量条件的选择。 4.定性和定量分析方法。 学习要点 知识目标 教学目标 能力目标 1、理解掌握朗伯-比尔定律的意义及应用。 2、掌握紫外光谱定量分析的原理和方法。 1、学会分光光度计的使用。 2、初步学会对物质进行定性、定量分析。 第一节 光谱分析法概述 一、电磁辐射与电磁波谱 电磁辐射:是一种以电磁波的
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