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革兰染色法(Gram stain) (一)原理：几种学说 1、等电点学说：G+菌的等电点比G-菌的等电点低，在同一pH条件下，阳性菌比阴性菌所带电荷要多，与带正电荷的碱性染料结合力强，不易脱色。 2、化学学说：G+菌含有大量核糖核酸镁盐，与进入细胞浆内的结晶紫和碘牢固结合成大分子复合物，不易被95％乙醇脱色，而G-菌含此种物质少，故易被乙醇脱色。 3、细胞壁结构学说：G+菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚且具有三维空间结构，脂类含量低，乙醇不易透入，而且95％乙醇可使细胞壁脱水，细胞壁间隙缩小，通透性降低，阻碍结晶紫和碘的复合物渗出，而G-菌的细胞壁较疏松，肽聚糖层薄且无三维空间结构，含脂质量高， 易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性增高，细胞内的结晶紫和碘的复合物被溶出而脱色。目前认为细胞壁与化学组成上的差异是染色反应不同的主要原因。 (二)试剂：  l、结晶紫溶液 2、革兰碘液 3、95％乙醇 4、稀释石炭酸复红 (三)操作步骤： 细菌标本涂片固定后，先用结晶紫(或龙胆紫)初染lmin；小水流冲洗后加碘液媒染1 min；小水流冲洗后用95％乙醇脱色1 min；小水流冲洗后稀释复红复染30sec，小水流冲洗后使涂片自然干燥，镜检。 (四)结果判定： 1、革兰阳性细菌：不被乙醇脱色仍保留紫