高二生物同步精品课堂（提升版）（课件）专题1.1基因工程DNA重组技术的基本工具（新人教版选修3）.pptVIP

选修3专题1基因工程 DNA重组技术的基本工具 一、基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 原理 结果 基因拼接技术或DNA重组技 术 生物体外 基因 DNA分子水平 基因重组 人类需要的基因产物 【典型例题】 20世纪70年代创立了一种新兴的生物技术――基因工程，实施该工程的最终目的是（ ） A.定向提取生物的DNA分子　　　　　　　　 B.定向地对DNA分子进行人工剪切 C.在生物体外对DNA进行改造　　　　　　 D.定向地改造生物的遗传性状 点拨：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA重组和转基因技术，最终定向地改造生物的遗传性状，造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。ABC都是基因工程的技术环节，D是最终目的。 D 二、基因工程的基本工具 1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶） （1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 （2）作用：识别特定的核苷酸序列并切开相应两个核苷酸之间的磷酸二酯键，结果：产生黏性末端或平末端。 （3）常用类型：EcoRⅠ限制酶和SmaⅠ限制酶 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 【典型例题】 （2015天津卷.8）（1）本研究构建重组质粒时看选用四种限制酶，其识别序列如下图，为防止酶切片段的自身环接，可选用的限制酶组合是______或__________。 A.①② B.①③ C.②④ D.③④ B C 【归纳提升】确定限制酶的种类 (1)根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类 ①应选择切点位于目的基因两端的限制酶，如图甲可选择PstⅠ。 ②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶，如图甲不能选择SmaⅠ。 ③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶(但要确保质粒上也有这两种酶的切点)。 (2)根据质粒的特点确定限制酶的种类 ①所选限制酶要与切割目的基因的限制酶相一致，以确保具有相同的黏性末端。 ②质粒作为载体必须具备标记基因等，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因；如果所选酶的切点不止一个，则切割重组后可能丢失某些片段，若丢失的片段含复制起点区，则切割重组后的片段进入受体细胞后不能自主复制。 基因工程利用某目的基因(图甲)和Pl噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ、EcoRⅠ和Sau3AⅠ。下列分析错误的是(　　) A．构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体 B．构建重组DNA时，可用EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体 C．图乙中的Pl噬菌体载体只用EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团 D．用EcoRⅠ切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA D 2．“分子缝合针”——DNA连接酶 （1）作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 （2）种类：按来源可分为E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。 E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端之；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。 （3）DNA连接酶和限制酶的关系 【典型例题】 如图所示为部分双链DNA片段，下列有关基因工程中工具酶功能的叙述，错误的是（ ） A．切断a处的酶为限制酶 B．连接a处的酶为DNA连接酶 C．切断b处的酶为DNA解旋酶 D．连接b处的酶为RNA聚合酶 D 【方法点拨】DNA几种酶比较 作用底物 作用部位 形成产物 限制酶 DNA分子 磷酸二酯键 黏性末端或平末端 DNA连接酶 DNA片段 磷酸二酯键 重组DNA分子 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 子代DNA DNA解旋酶 DNA分子 碱基对间的氢键 形成脱氧核苷酸单链 DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 游离的脱氧核苷酸 【变式训练】 下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化， 图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用过程的正确顺序是（ ） A.①②③④ B.①②④③ C.①④②③ D.①④③② C 3.“分子运输车”---载体 （1）用途：将目的基因导入受体细胞。 （2）种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等，最常用的是质粒。 （3）质粒：本质为细菌拟核外的小型环状DNA。 质粒具备条件 条件 用途 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于