微生物培养基中U（Ⅵ）和U（Ⅳ）测定方法的建立及稳定性研究.docVIP

微生物培养基中U（Ⅵ）和U（Ⅳ）测定方法的建立及稳定性研究 　　摘 要 为了消除微生物培养基对U（Ⅵ）和U（Ⅳ）质量浓度测定的影响，建立微生物培养基中测定U（Ⅵ）和U（Ⅳ）质量浓度ρ的方法，优化了在稀盐酸体系中利用U（Ⅵ）制备U（Ⅳ）的条件：10 mg/L U（Ⅵ），锌粒用量12 g/L，反应时间180 min.通过测定ρ总U减去ρU（Ⅵ），计算出ρU（Ⅳ），建立了同时测量微生物培养基中ρU（Ⅵ）和ρU（Ⅳ）的分光光度法.微生物培养基对U（Ⅵ）和U（Ⅳ）有明显影响：LB和NA培养基对U（Ⅵ）的影响率分别为37.3%和47.9%；单组分中蛋白胨和牛肉膏对U（Ⅵ）的影响率较大，分别达到33.5%和19.7%；而U（Ⅵ）和U（Ⅳ）在TGY培养基中较稳定.采用该方法测量微生物培养基中ρU（Ⅵ）和ρU（Ⅳ），能消除微生物培养基对U的影响，且具有精密度高、操作简单等优点，能实现生物样品中ρU（Ⅵ）和ρU（Ⅳ）的快速测量. 　　关键词 U（Ⅳ）的制备；分光光度法；微生物培养基；U稳定性 　　中图分类号 O614.62 文献标识码 A 文章编号 1000-2537（2015）03-0022-07 　　随着核工业的发展，含U放射性废物不断进入环境中，对人类健康和生态环境造成威胁.地壳表层平均铀含量为3 μg/g[1].铀矿冶、核电站、核武器实验等含铀废水中，铀的质量浓度约为5 mg/L，远高于国家排放标准（0.05 mg/L），也远高于世界卫生组织（WHO）规定饮用水标准最高铀质量浓度50 μg/L [2-3].高浓度铀的放射性和化学毒性影响动物和人体肾脏和骨骼的正常功能[4]，因此，U污染的环境修复问题已成为当前的研究热点.据报道微生物修复U污染比物理化学修复更具有显著优势[5].自然环境中，U有Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ和Ⅵ 4种价态，U（Ⅲ）和U（V）不稳定，极易歧化，因此U（Ⅵ）和 U（Ⅳ）是两种最主要的价态[6]. 　　因U易受环境中pH值、有机物、氧化还原条件等的影响，其化学形态在实际环境体系中可互相转化，增加了U价态分析的难度. 　　目前，微生物培养基中U（Ⅵ）和 U（Ⅳ）的测量方法为偶氮胂（Ⅲ）分光光度法[7-8].其原理是U（Ⅵ）和 U（Ⅳ）在酸性条件下与偶氮胂（Ⅲ）形成1∶1络合物，在特定波长处测其吸光度[9-10].但偶氮胂（Ⅲ）分光光度法在U（Ⅵ）和U（Ⅳ）质量浓度的测量过程中，忽略了微生物培养基对U的影响及U（Ⅳ）的不稳定性，而不能同时准确测量其中U（Ⅳ）的质量浓度.因此，为了深入研究微生物对U的氧化还原作用，有必要在微生物培养基中建立一种能同时测量U（Ⅵ）和U（Ⅳ）质量浓度的方法. 　　通过将U的多形态分析转为单一形态分析，即运用分光光度法，通过U的氧化还原，测量体系中U（Ⅵ）和总U的质量浓度ρ，ρ总U减去ρU（Ⅵ）得出ρU（Ⅳ），可消除培养基中U（Ⅳ）不稳定性及微生物培养基对其影响问题.U（Ⅳ）作为U（Ⅵ）的还原产物，也是氧化还原过程中的反应试剂，其制备方法包括还原剂还原法（金属还原剂、汞齐及合金还原剂、低价金属化合物）、电化学法、光催化法等[11].其中部分还原方法操作复杂、易受还原剂、催化剂及反应条件等的限制.因此需寻找一种操作过程简单、不易引入干扰物质，避免在HCl、HF、稀H2SO4、低浓度HClO4中U（Ⅵ）还原产物U（Ⅳ）的再氧化作用的U（Ⅳ）制备方法；再运用U的氧化还原过程建立U（Ⅵ）和U（Ⅳ）的分光光度法；通过该方法研究U（Ⅵ）和U（Ⅳ）在微生物培养基中的稳定性，为微生物固定U（Ⅵ）选用适合的培养基提供理论依据. 　　1 材料与方法 　　1.1 材料和试剂 　　TGY培养基（胰蛋白胨酵母葡萄糖培养基）：胰蛋白胨5 g，酵母粉3 g，葡萄糖1 g，定容至1 000 mL，pH 7.0～7.2. 　　LB培养基（溶菌肉汤培养基）：酵母粉5 g，蛋白胨10 g，氯化钠10 g，定容至1 000 mL，pH 7.2～7.4. 　　NA培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，氯化钠5 g，定容至1 000 mL，pH 7.0. 　　1 000 mg/L U（Ⅵ）标准储备液：1.782 2 g醋酸双氧U（UO2（CH3COO）2?H2O上海谱振生物科技有限公司），溶解并定容至1 000 mL，摇匀，避光保存，其他各浓度U（Ⅵ）由此溶液稀释获得. 　　0.05%偶氮胂（Ⅲ）显色液（上海阿拉丁）：偶氮胂（Ⅲ）0.05 g，定容至100 mL. 　　无砷锌粒（成都市科龙化工试剂厂）.其他试剂均为国产分析纯. 　　1.2 U（Ⅵ）标准曲线的制作 　　取1 000 mg/L U（Ⅵ） 2 mL，去离子水定容至50 mL，配制成40 mg/L U（Ⅵ），8支10 mL比色管，分