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山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题2 微生物的培养与应用 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题2 微生物的培养与应用 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 返回 课题3 分解纤维素的微生物的分离 课标领航 1.简述纤维素酶的种类及作用。 2.从土壤中分离出分解纤维素的微生物,讨论这类微生物的应用价值。 【重点】 分离分解纤维素的微生物的实验流程。 【难点】 纤维素分解菌的筛选。 情境导引 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物,其纤维素的质量分数可达92%~95%,亚麻、木材、作物秸秆等也富含纤维素。许多商品纤维素都是由天然纤维素制得的。纤维素是有机高分子化合物,呈白色、无气味、无味道,是纤维状结构的物质,不溶于水,也不溶于一般有机溶剂。 核心要点突破 知能过关演练 课题3 分解纤维素的微生物的分离 基础自主梳理 基础自主梳理 一、纤维素与纤维素酶 1.纤维素 (1)化学组成:由____________三种元素组成,是地球上含量最丰富的多糖类物质,分子通式为________________。 (2)分布及作用:_____是自然界中纤维素含量最高的天然产物,此外木材、作物秸秆等也富含纤维素;纤维素是构成值物_______的主要组成成分之一。 C、H、O (C6H10O5)n 棉花 细胞壁 (3)某些商品纤维素 ①水溶性的羧甲基纤维素钠(CMC-Na); ②不溶于水的微晶纤维素(Avicel)。 2.纤维素酶 (1)组成:纤维素酶是一种_________,包括三种组分,即C1酶、Cx酶、________________。 (2)作用:C1酶和Cx酶使纤维素分解成_________;_____________将纤维二糖分解为葡萄糖。 二、纤维素分解菌的筛选 1.方法:刚果红染色法,常用的有两种:一种是先培养______,再加入刚果红进行___________,另一种是在倒平板时就加入刚果红。 复合酶 葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖苷酶 微生物 颜色反应 2.原理 (1)含纤维素的培养基中加入的________,可与纤维素形成____________。 (2)当纤维素被_____________分解后,形成的纤维二糖、________不和刚果红发生这种反应,红色复合物就无法形成,培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,可通过是否产生________来筛选纤维素分解菌。 三、实验设计 1.实验流程:土壤取样→选择培养(此步可省略)→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生_________的菌落。 刚果红 红色复合物 葡萄糖 透明圈 透明圈 纤维素酶 2.土壤取样 采取土样时,可以选择____________的环境。 3.选择培养 (1)目的:增加纤维素分解菌的______,确保能够从样品中分离到所需要的微生物。 (2)操作方法:将土样加入装有30 mL___________的锥形瓶中,将锥形瓶固定在摇床上,在一定温度下振荡培养1~2 d,直至培养液变混浊,也可重复选择培养。 4.涉及的生物技术主要有:培养基的制作、无菌操作、稀释涂布平板法、________________、土壤取样等。 纤维素丰富 浓度 选择培养基 选择培养基的制作 四、课题延伸 1.为确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌,需要进行发酵产纤维素酶的实验,纤维素酶的发酵方法有_________和___________两种. 2.纤维素酶的测定方法,一般是对纤维素酶分解______等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。 液体发酵 固体发酵 滤纸 核心要点突破 纤维素分解菌的筛选 1.刚果红染色法 (1)纤维素+刚果红→红色复合物,刚果红并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 (2)在培养基中接种纤维素分解菌的培养过程中,纤维素被纤维素酶分解后,刚果红—纤维素红色复合物无法形成,出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2.筛选过程中用到的两种培养基 (1)名称:①纤维素分解菌的选择培养基;②纤维素分解菌的鉴别培养基。 (2)区别 ①纤维素分解菌的选择培养基为液体培养基,利用液体培养基能使营养成分充分消耗,以增加纤维素分解菌的浓度。 ②纤维素分解菌的鉴别培养基为固体培养基,因为要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。 ③在上述选择培养基中能以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长,而其他绝大多数微生物不能正常生长;而在上述鉴别培养基中,绝大多数微生物都可以正常生长。 分析下面培养基的配方,回答问题。纤维素分解菌的选择培养基: 纤维素粉 5 g NaNO3 1 g Na2HPO4·7H2O 1.2
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