【2017年整理】燕窝中胶原蛋白的测定.docVIP

福建农林大学金山学院实践报告 PAGE PAGE 1 福建###########实践报告 燕窝中胶原蛋白的测定 专 业： 食品质量与安全 学 号： ********* 姓 名： ****** 实践课程： 科研实践 实践项目： 食品理化检验 实践单位： ******科研大楼 指导教师： ***** *** 实践单位 评分 实践报告 评分 总评分 2011 年 1月 15日 燕窝中胶原蛋白的测定 摘要:本文以燕窝皮为原料，采用木瓜蛋白酶酶解提取胶原蛋白。考察了底物浓度、酶浓度、酶解时间、pH, 温度等工艺条件对胶原蛋白提取率的影响。试验结果表明:木瓜蛋白酶添加量为1%,料液比为1:10,酶解时间8h,酶解温度为40℃ 关键词：燕窝、木瓜蛋白酶、胶原蛋白测定。 燕窝性平、味甘，人肺、胃二经，有补肺养阴、化痰止咳、润燥泽枯、补中益气的功效，主治肺痊、咳嗽、咯血、虚损、痰喘等症，是家喻户晓的药食两用高级滋补品。燕窝基原为雨燕科Apodidae金丝燕属Collocalia的几种鸟类唾液为主筑成的巢。[1]主产于印度尼西亚、泰国、缅甸、日本以及我国偏南部地区等地，广东怀集在每年农历六月六都有攀岩采燕窝的习俗。随着人们生活水平的提高，燕窝的需求量越来越大。目前市场销售的燕窝商品多来自东南亚，众多的燕窝研究文献中，未见有对我国燕窝进行系统研究的文章。本文对广东怀集、云南、海南等地产燕窝总灰分、总氮量及氨基酸含量进行分析，同时以印尼产燕窝对照，结果，两者含量相近，提示中国产燕窝具有良好开发利用价值。 1．材料与方法 1．1材料 ①燕窝 ②化学试剂：羟脯氨酸，氯胺T，盐酸，氢氧化钠，柠檬酸，柠檬酸三钠，高氯酸，异丙醇，对——二甲基氨基苯甲醛等均为分析纯试剂。 1．2仪器 ①Ｘiangyi L-530多管架自动平衡离心机 长沙高新技术产业开发区湘仪离心机仪器有限公司； ②HH-6数显恒温水浴锅 金坛市精达仪器制造厂； ③UV-2000型紫外可见分光光度计 上海洪富仪器仪表有限公司； ④AL104梅特勒-托利多分析天平 上海茸岩仪器有限公司； ⑤ Delta320酸度计(梅特勒一托利多公司)； ⑥电热恒温鼓风干燥箱； ⑦MARS5型微波消解仪(美国CEM公司)。 1．3方法 1.3．1测定原理[2] 胶原蛋白在浓酸或浓碱的条件下，经过高温长时间水解，彻底变成游离的氨基酸。其中的羟脯氨酸首先用氯胺T氧化生成含吡咯环的物质，然后以高氯酸溶液除去剩余的氯胺一T，加入对——二甲基氨基苯甲醛溶液作为显色剂，生成红色化合物，用紫外可见分光光度计，在558am处测吸光值。从而可得羟脯氨酸的质量浓度。 1. 0．75％溶液氯化亚锡：将氯化亚锡7．5g溶于500mL水中，再加入500ml浓盐酸： 12moUL盐酸溶液： lmol／L、10mol／L氢氧化钠溶液： 缓冲液：将50g柠檬酸，26_3g氢氧化钠和146．1g结晶乙酸钠fGB694)溶于水．稀至1L．此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。 氯胺T溶液：将1．41g氯胺T，溶于10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)； 显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35mL高氯酸溶解。缓慢加入65mL异丙醇； 500ug／mL羟脯氨酸标准储备液：称取50．0mgCL(一)-羟脯氨酸用少量水溶解，加一滴6moUL盐酸，定容至lOOmL容量瓶中： 5ug／mL羟脯氨酸标准工作液：吸取标准储备液5．0Oral于500mL容量瓶中，定容。 1．4试样处理 准确称取一定量样品，精确到0．0001g。使样品蛋白质含量在10-20mg范围内；将称好的样品放予水解管中。在水解管内加12mol／L盐酸10～15mL(视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样品(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3-5rain，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近Opsi)，然后充人高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110-．112的恒温干燥箱内，水解6h后取出冷却。打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中．用6moI／L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸，冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中，用10mol／L、lmol／L氢氧化钠溶液调节pH为8+-0．2，过滤于50mL容量瓶中，用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀，反复三次，把洗液并入滤液中，以水洗至刻度，摇匀备用。 1．5分析测定 1．5．1标准曲线的