洋葱多糖的分离纯化.docVIP

目 录 中英文摘要 2 前言 3 1 实验部分 4 1.1实验原料与仪器 4 1.2实验方法 4 2 结果与讨论 6 2.1 DEAE纤维素DE-52初步分离洋葱多糖 6 2.2葡聚糖凝胶进一步分离多糖 8 2.3吸光度法测定多糖分子量 9 3 结论 10 参考文献 11 声　　明 13 致　　谢 14 洋葱多糖的分离纯化 沈红霞 （内江师范学院 化学化工学院，四川 内江 641112） 酶提法洋葱多糖经过脱蛋白，DEAE-52纤维素层析柱和葡聚糖凝胶G-200层析柱纯化得到精制洋葱多糖。该洋葱多糖为浅黄色粉末，易溶于水。用吸光度法测定精制的洋葱多糖的吸光度，测定结果为523250。 The Separation and Purification of Polysaccharide Onion SHEN Hong-xia (College of Chemistry and Chemical Engineering， Neijiang Normal University，Neijiang，Sichuan 641112，China) Abstract: Enzyme formulation onion polysaccharide urified by TCA, DEAE-52 cellulose column chromatography and SephadexG-200 column chromatography purification to obtain the refined polysaccharide onion. The purified polysaccharide is pale yellow powder and easily soluble in water. The molecular weight was determined by absorbance method and results for 523250. Key words: Onion polysaccharide; Separation; Purification; Molecular weight determination 洋葱多糖的分离纯化 沈红霞 （内江师范学院 化学化工学院，四川 内江 641112） 前言 近几十年，分子生物学发展，人们认识到多糖及其复合物分子具有极其重要的生物功能它在调节免疫功能、细胞与细胞的识别细胞间物质的运输等方面都发挥巨大的作用。从植物、微生物和藻类中提取的多糖能够治疗多种免疫缺损疾病和使机体免疫系统受到严重损伤的癌症、抗感染和消化性溃疡，还有降低血糖和血脂等功效[1]。由于多糖的药用功能强，因此多糖的制备及分离纯化也就自然而然的受到重视。 多糖的提取方法较多[2-3]，目前较为成熟的主要有以下几种：1、热水提取法[4]；2、稀碱水溶液提取法[5]；3、酶提法[6]；4、超声提取[7]等方法。提取出来必须进一步进行分离纯化。多糖分离纯化的主要方法有以下几种：1、分步沉淀法[8]，此法主要不同的多糖在低级醇或酮中溶解度，分子量大的多糖在乙醇（或丙酮）中溶解度分子量小的多糖乙醇（或丙酮）小，所以加大乙醇（或丙酮）浓度可将分子量不同的多糖分别沉淀出来。但在分步沉淀过程中不可避免的会出现共沉淀现象，加入的多糖溶液浓度以及乙醇加入速度都会影响沉淀结果；2、盐析法[9]，。但效率较低，易产生共沉淀；3、金属络合法[10]，根据不同多糖与各种钡、铜、钙和铅离子形成络合物而沉淀的性质进行；4、季铵盐沉淀法[11]，根据长链季铵盐能与酸性多糖或长链高分子量多糖形成络合物，在低离子强度的水溶液中不溶解的，其沉淀出来，然后增加溶液的离子强度到一定范围，络合物则逐渐离解，最终溶解。常用于分离酸性多糖及中性高分子量多糖；5、柱层析法，纤维素层析柱法和阴离子交换柱层析法。纤维素层析柱纤维素，用乙醇将柱内平衡，多糖混合物全部沉淀上面。用浓度不同的乙醇溶液洗脱，不同多糖就依次洗脱出来。阴离子交换柱层析是目前多糖分离纯化中应用最普遍的一种方法，阴离子交换柱层析适合于分离各种酸性、中性多糖及粘多糖。 阴离子交换柱层析法分离效果好，操作简单。且可分离的多糖种类多。它的分离机理不是单一的离子交换，是吸附与解吸附其不仅可用于中性多糖与酸性多糖的分离，也可用于不同中性多糖的分离纯化。洋葱多糖主要含酸性 多糖，此外还有部分中性多糖[12]，因此本实验采用阴离子交换柱层析法纯化洋葱多糖。1 实验部分 1.1实验原料与仪器 原料: 洋葱多糖(酶法提取) 仪器: UV-752紫外可见分光光度计（上海茂欣仪器有限公司）；层析柱：1.6cmx50cm（北京瑞达恒辉科技发展有限公司）；BT