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动物分室2005年总结 一、今年研究任务和进展 1．重要进展 动物分室李震研究员留学荷兰期间与荷兰科学家合作发现动物冠状病毒侵染细胞的新机制，该项研究成果今年11月在世界权威性的病毒学期刊《Journal of Virology》发表。 科技兴农重点攻关项目“重组牛、羊白细胞介素-2下游处理技术研究和动物区域试验”（2001年-2004年）进行了课题鉴定，专家认为该课题在上游基因构建以及下游分离纯化变复性技术方面均有较大创新，特别在牛白细胞介素－2（IL-2）基因工程菌高密度发酵、牛IL-2包含体蛋白变复性技术和临床应用等方面国内外尚未有相同研究，为rbIL-2的中试生产和产业化开发打下坚实的基础。 动物分室的基因工程猪α干扰素表达获得突破。已经筛选到高表达的菌株，目前正在进行高密度发酵和体外分离纯化的研究。 科技兴农重点攻关项目《地方猪种质资源长期保存技术研究》，完成猪精子、胚胎冷冻保存技术研究，进行一定规模的输精和胚胎移植；建立了猪胚胎超低温冷冻保存技术体系，冻胚解冻后复苏率达30%以上，获得冷冻胚胎后代； 此次是我国超低温（-196℃）冷冻保存猪胚胎获得成功的首次报道，解放日报、新华社等作了专题采访报道；相关研究论文将在《科学通报》、《畜牧兽医学报》上发表，并在2005年10月在韩国忠南大学举行的相关国际学术研讨会上作了40分钟的大会报告。 2．其他研究项目进展 1）动物分室参与的国家863项目“免疫增强型鸡球虫基因工程疫苗 ”的研制（2002年—2005年），今年进入关键年，已克隆了数条家禽细胞因子基因。 2）市科委重点实验室项目《猪核移植胚DNA甲基化改变与“印迹”基因表达特征研究》，按计划任务书进行，完成猪体细胞核移植重构胚的购建及激活；重组胚基因组DNA甲基化水平变化的定量分析。 3）市农委四新项目《南德温肉牛种质保存和生产应用技术推广》，研究出适于大型肉牛——南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术。选择适龄南德温牛11头为供体牛进行CIDR-FSH-PG超数排卵处理。按时发情，反应率100%，共采胚99枚，获可用胚胎65枚，平均每头5.91枚，可用胚胎率65.0%，可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%，共移植受体9头，妊娠6头，受胎率66.67%，共产犊9头，其中产双犊3头，其余胚胎进行了冷冻保存。 通过本研究实现了以南德温牛为供体，南阳牛为受体的CIDR-PG-FSH的处理系统，建立了超数排卵，同步发情，胚胎移植，胚胎冷冻保存的整套技术和方法，并获得了较高的可用胚胎率及较高的受胎率，为南德温牛的快速扩群，育种工作及加速黄牛改良提供了有效的方法。 4）科技兴农重点攻关项目“猪流感监测、诊断技术研究”：利用大肠杆菌原核表达系统以重组蛋白的形式成功的表达了猪流感病毒的核衣壳蛋白；完成了重组NP蛋白小量发酵工艺条件的优化，获得外源蛋白表达量占蛋白总量20-30%，基本稳定。 用表达产物作琼脂扩散试验进行活性鉴定，只与猪流感病毒两亚型形成明显的阳性沉淀线，与其它8种猪病原阳性血清呈阴性反应，证实该融合表达的蛋白具有生物学活性，特异性好，可作为检测用抗原。 另外设计了病毒亚型引物组合。分别建立单一扩增不同血清亚型的PCR体系，建立了条件稳定的单一PCR体系，筛选出扩增效果好的引物对，用于猪流感检测的多重PCR。根据各亚型引物扩增片段大小不同，反应条件的差异，将各引物配比组合，形成不同的配组，构建多重PCR组合。 5）动物分室参与的国家863项目“口蹄疫分子流行病学研究与检测”本专题基本完成了项目要求的研究内容，除短期内无法完成流行株测序工作外，其余各项均达到项目要求指标，其中流行病学调查方面还超额完成了项目规定的内容。 本室保存的历年血清样品4500余分，2004年、2005年又采集上海、江苏、安徽、南京等地猪牛血清共计4700余份，共检测华东地区血清样品11885份，完成预期检测指标9000份。 6）科技兴农重点攻关项目“口蹄疫注苗与感染牛（血清）鉴别诊断试剂盒中试生产研究” 经3次发酵，获得重组表达抗原可用于50000头份口蹄疫感染抗体检测量试剂盒生产。完成了组装试剂盒的各条件优化，对试剂盒试剂盒特异性、敏感性、保存期进行了相关研究，证实本试剂盒特异性高达97.8%，敏感性与UBI相比较，检测灵敏度高12.5%，符合率达96%。完成了试剂盒保存期试验，在4℃条件下，至少保存6个月。起草、制订了ELISA试剂盒制造规程，申请发明专利一项，目前进入实质审查阶段。完成2000头份试剂盒区域试验。 7）科技兴农重点攻关项目“预防仔猪细菌性腹泻微生态制剂的研究” 经一年多的努力，送鉴定的三株菌种，已由农业部中国兽药监察所鉴定，分别属嗜酸乳杆菌，pH3.49；粪链球菌和芽孢杆菌。结论是送检三株菌株属农业部