【2017年整理】禾谷镰刀菌拮抗菌筛选研究方案.docVIP

由禾谷镰刀菌引起的小麦赤霉病是小麦重要病害之一，也是影响中国小麦生产的重要病害[2]。小麦赤霉病别名红麦头、烂麦头、麦穗枯。在全世界普遍发生，气候湿润多雨的温带地区受害严重潮湿和半潮湿区域。从幼苗到抽穗都可受害，主要引起苗枯、茎基腐、秆腐和穗腐，穗腐。 小麦赤霉病的表现 小麦赤霉病的发病条件 赤霉病子囊壳和子囊孢子，最适和的生长温度为 24～25℃，最低9～10℃，最高32℃。在适宜的条件下2～3d 即可产生子囊壳，5～10d 形成子囊孢子。在小麦抽穗前后，子囊孢子会随风飘散，飘落在麦穗上，颖内花药上腐生，整个花器及小穗还会产生分生孢子群侵染，使病害扩展蔓延[4]。 气象条件对小麦赤霉病的影响较大。当平均气温为9℃以上，3～5d 的雨天时，便形成了子囊孢子。会十分有利于子囊孢子的释放和侵染，小麦赤霉病很有可能大流行。 小麦赤霉病的危害 小麦赤霉病是造成农业损失的主要原因之一[5]，联合国粮农组织（FAO）统计，每年由植物病害引起的减产平均损失为总产量的10%～15%，而其中的80%的损失是由真菌引起的[6]。 小麦赤霉病会，同时还会小麦的。该还能产生以脱氧雪腐镰刀菌烯醇为主的真菌毒素，能较大的危害人、畜。当有4%的病麦时就不能使用了，这时小麦已经失去了利用价值。 1950年以来全国赤霉病大流行12年，中度流行17年，流行的频率为46.8%。1985年全国赤霉病又大流行，仅河南省发病面积就达3.0×106 hm2。2000以来赤霉病在中国大流行频率不断增加，发病面积呈明显扩大趋势，有9个年份赤霉病的发生面积就超过了3.3×106 hm2。其中仅河南省就有7年的发病面积超过6.7×105 hm2。在2012年的赤霉病大流行中，山东省南部和西南部较重，河南省整体偏重，豫南更重，安徽和江苏普遍严重[7]。 赤霉病严重威胁小麦的安全生产，一般的流行年份可引起5%～10%的产量损失，大的流行年份可导致相当多的田块绝收。根据调查2008～2009年度全国11 个省的1018个饲料样品的毒素污染情况发现，DON毒素的检出率达95.8%，超标率达17.7%，其中西北地区的超标率高达38.1%，华北和华中地区的超标率则分别为21.0%和20.1%[8]。 本课题便是用牛肉膏蛋白胨培养基涂布平板法从小麦根际土壤中分离出细菌，纯化后用平板对峙法进行初筛和复筛。通过形态学方法、生理生化分析进行初步鉴定，研究其抗菌活性，为寻找有效抵御小麦赤霉病的方法奠定基础。 2 材料与方法 2.1 供试病原菌和小麦根际土样 供试植物病原真菌：禾谷镰刀菌（9435实验室保存）。 小麦根际土样：河南工业大学西门大谢村麦田。 2.2 试剂及仪器 2.2.1 试剂名称及生产厂家 试剂名称 规格 生产厂家 蛋白胨 蔗糖 牛肉浸膏 BR AR BR 北京双旋微生物培养基制品厂 天津市瑞金化学品有限公司 北京双旋微生物培养基制品厂 可溶性淀粉 BR 天津市瑞金特化学品有限公司 对二甲基氨基苯甲醛 AR 上海试剂三厂 氯化钠 AR 天津市德恩化学试剂有限公司 酵母膏 AR 北京奥博星生物技术有限责任公司 琼脂粉 BR 上海化学试剂厂有限公司 溴百里香酚兰 AR 上海三爱思试剂有限公司 葡萄糖 AR 天津市科密欧化学试剂有限公司 氢氧化钠 AR 天津市科密欧化学试剂有限公司 磷酸氢二钾 AR 天津市化学试剂三厂 柠檬酸钠 AR 湖南省医药公司化玻站 硫酸镁 AR 天津市永远化学试剂开发中心 乳糖 无水乙醇 AR AR 天津市科密欧化学试剂有限公司 天津市永大化学试剂开发中心 磷酸二氢铵 AR 天津化学试剂三厂 二甲苯 AR 洛阳昊华化学试剂有限公司 硝酸钾 AR 天津市瑞金化学品有限公司 乙酸（冰醋酸） AR 开封市芳晶化学试剂有限公司 浓盐酸 AR 洛阳昊华化学试剂有限公司 三氯化铁 AR 天津市化学试剂工厂 碘 AR 天津市科密欧化学试剂有限公司 甲基红 AR 天津市科密欧化学试剂有限公司 结晶紫 AR 天津市化学试剂三厂 次氯酸钠 AR 天津市光复精细化工研究所 番红花红T AR 天津市科密欧化学试剂研究所 2.2.2 实验仪器 仪器名称 仪器型号 生产公司 电热恒温鼓风干燥箱 XMTD-8222 上海精宏试验设备公司 高压蒸汽灭菌锅 SX-700 日本TOMY 震荡培养箱 HZQ-X100 哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 电热恒温培养箱 DHP-9052 上海浦东荣本科学仪器有限公司 台式离心机 TDL-5A 上海菲恰尔分析仪器有限公司 漩涡混合器 HQ-60-Ⅱ 北京北方同正生物技术发展有限公司 无菌操作台 SW-CJ-2F 苏州净化设备有限公司 移液枪 KHB 上海科华实验系统