亲和层析法纯化胰蛋白酶[精选].pptVIP

2亲和介质合成 2.1琼脂糖凝胶层析介质(Sepharose 4B)的活化 2.1.1 琼脂糖凝胶层析介质的处理 称取10克琼脂糖凝胶层析介质，置于G-3玻璃烧结漏斗内，用100ml 1.0mol/L NaCl溶液抽洗（少量多次），100ml 蒸馏水抽洗，抽干后转移到100ml三角瓶中备用。 2.1.2配方 琼脂糖凝胶层析介质--QT410克 蒸馏水7ml 1,4二氧六环8 ml 2 mol/L NaOH 6.5ml 环氧氯丙烷1.5ml。 2.1.3活化 将配制的好介质的三角瓶，放入45℃恒温水浴中，于160转/分钟，振摇活化2小时。停止活化，转移到G-3玻璃烧结漏斗内，抽去活化剂，用100ml蒸馏水洗（少量多次），转移100ml到三角瓶中，准备偶联。 2.2偶联 称取约100mg鸡卵粘蛋白，用10ml 0.1mol/L pH9.5 Na2CO3缓冲液充分溶解。取0.1ml稀释10倍测定OD280，计算溶液的蛋白浓度。然后将溶解好的鸡卵粘蛋白溶液，转移到100ml三角瓶中与活化的琼脂糖凝胶介质混匀。在40℃恒温水浴中，于160转/分钟，振摇偶联22小时左右，停止偶联。 2.3洗涤 取一个洗净的500ml抽滤瓶，将已经偶联好的琼脂糖凝胶层析介质转移到G-3玻璃烧结漏斗内抽滤，收集滤液，测定滤液中剩余的鸡卵粘蛋白的含量。 用100ml 1.