【2017年整理】细胞工程制药-复习.docVIP

绪论 干细胞用途：①用于药物的研究或毒性的检测。②实验室中研究基因的控制与表达。 ③可以用来分化培养一些治疗细胞。 （一） 名词解释 1. 细胞工程制药：根据细胞生物学和工程学原理，运用体外细胞培养技术定向改变细胞遗传特征，建立和创建新型细胞系（株），并通过专门的细胞培养方法研究细胞生命现象和活动规律，采用工程化的大规模细胞培养方法，探索生产方法和工艺，制造药用生化和生物制品。 （1）细胞培养基本技术 （2）细胞工程常用技术 （3）细胞工程制药应用技术 2. 生物工程：以生命科学为基础，利用生物体系和工程学原理生产生物制品和创造新物种的一门综合技术。 ①第一代生物工程 ②近代生物工程 ③现代生物工程 （1）发酵工程 （2）酶工程 （3）蛋白质工程 （4）基因工程 （5）细胞工程：以细胞为基本单位或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种或创造新品种；或加速繁育动、植物个体；或获得某种有用的物质的过程。 Ⅰ、植物细胞工程 Ⅱ、动物细胞工程 Ⅲ、微生物细胞工程 3. 细胞与组织培养：生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。 体外（in vitro）培养——细胞工程的最基本技术 4. 细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 5. 胚胎工程：以生殖细胞和胚胎细胞为对象进行的操作，主要技术包括体外受精、胚胎切割、胚胎移植等。 6. 干细胞：动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞。 （1）胚胎干细胞：来自囊胚期的细胞团，属于全能干细胞，每个细胞可以发育成为完整的个体。 （2）组织干细胞：存在于成体组织中，属单能或多能干细胞，可以定向分化为一种或几种不同的组织。 7. 细胞重组：细胞融合技术与细胞核质分离技术结合，在融合介子诱导下，使胞质体与完整细胞合并，重新构成胞质杂种细胞的过程。 （二） 动物细胞培养标志性事件人物 A.Barli 细胞融合 1859 黏虫生活史 首例克隆动物成功的报道 1962 非洲爪蟾小肠上皮细胞的核（未受精卵） （三） 脱分化再分化 1. 脱分化：一个成熟细胞转变为分生状态的过程。恢复细胞的分裂活性。 高度分化的细胞，通过诱导后，失去其特定结构和功能而转变成未分化细胞（愈伤组织）的过程。 2. 再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下转变为各种不同细胞类型的过程。 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。 （四） 植物细胞工程的基础——细胞全能性 细胞工程基础 （一） 实验室设置仪器（6个分区） 实验室是细胞工程研究的主要场所，应能满足：①清洗 ②培养基制备 ③灭菌 ④储藏 ⑤无菌操作 ⑥培养；等方面工作。 1. 基本实验室设置 （1）清洗室 （2）制备室 （3）灭菌室 （4）储藏室 （5）无菌操作室：实验材料接种操作，又叫接种室。 ①更衣间：鞋帽架、口罩 ②缓冲间：水槽、小型仪器 ③接种间（无菌间）：超净工作台、紫外灯、接种器械 （6）培养室——细胞培养（动物、植物） 2. 辅助实验室设置 （1）鉴定室——对培养材料进行细胞学鉴定和研究 （2）生化分析室——分析化验培养细胞产物 （3）温室——驯化移植 3. 常用仪器与设备 （二） 实验室污染 1. 污染：混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括微生物和化学物质。 （1）细菌污染——表现：①变浑浊，pH改变。②胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡。 （2）真菌污染——表现：①培养液中漂浮着白色小点，一般不浑浊。 ②倒置显微镜下可见菌丝排列。 ③念珠菌和酵母菌呈卵形散在细胞周边和细胞之间。 （3）支原体污染——表现：①不易发现。 ②电镜下可见其三层结构。 ③部分敏感细胞生长变慢，部分变圆，从瓶壁脱落。但多数无明显变化。 （4）病毒污染：①采用组织细胞培养法生产疫苗，如没除去潜在病毒的组织培养物，会产 生病毒污染。 ② （5）非同种细胞污染 （6）非细胞培养物污染（化学物质） 2. 污染的鉴别 （1）细菌、真菌污染的检测：①肉眼观察 ②镜下观察 ③接种观察 （2）支原体污染的检测：最常用——电镜观察（地衣红染色） 3. 污染的清除 （1）使用抗生素：预防比污染后再用好。联用比单用好。 （2）加温处理：支原体——41℃ （3）使用支原体特异性血清 （4）其他方法 动物细胞与组织培养 定义 动物细胞培养：从体内取出组织，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营 养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能的方法。 常泛指：所有体外培养的统称。 分类：器官培养、组织培养、细胞培养 细胞培