第七章_酶非水相催化研究报告.ppt

如醇腈酶催化醛与氢氰酸的反应 第五节 酶非水相催化的应用 酶 催化反应 应用 脂肪酶 酯合成 醇与有机酸合成酯类 转酯 各种酯类生产 聚合 二酯的选择性聚合 酰基化 甘醇的酰基化 蛋白酶 肽合成 合成多肽 酰基化 糖类酰基化 羟基化酶 氧化 甾体转化 过氧化物酶 聚合 酚类、胺类化合物的聚合 多酚氧化酶 氧化 芳香化合物的羟基化 胆固醇氧化酶 氧化 胆固醇测定 脂肪酶-位置选择性酯化反应 葡萄糖苷-6-O-酰基衍生物是一种可生物降解的非离子表面活性剂，它可以用脂肪酸和葡萄糖苷在脂肪酶催化下进行选择性酯化得到： 糖酯的合成 脂肪酶-消旋化合物选择性酯化 以2-取代-1,3-丙二醇和脂肪酸为原料，在有机溶剂介质中用脂肪酶(CCL)或猪肝酯酶（PLE）催化酯化反应，可得到较高光学纯度的R-或S-酯。 脂肪酶-消旋化合物的拆分 有机介质中用脂肪酶(PSL)催化酯化用于γ-羟基-α,β-不饱和酯的拆分。可以避免副反应的发生。 生物工程 反相胶束: 在与水不互溶的在量有机溶剂中,加入表面活性剂后形成的油包水的微小水滴； 1997年首次报道酶在反相胶束中具有活性(已发现40多种酶)； 酶分子处在反胶束内，稳定性好； 反胶束与生物膜有相似之处，适于研究生物膜表面酶的结构、催化特性、动力学特性。 水相 有机相 酶 水在酶催化反应中发挥着双重作用: 一方面,水分子直接或间接地通过氢键疏水键及范德华力等非共价键相互作用来维持酶的催化活性所必需的构象,与酶分子紧密结合的一层左右的水分子对酶的催化活性是至关重要的,称之为必需水,不同酶与必需水结合的紧密程度及所结合的必需水数量是不同的; 另一方面水是导致酶的热失活的重要因素,有水存在时随着温度的升高酶分子会发生以下变化而失活: (1)形成不规则结构; (2)二硫键受到破坏; (3)天冬酰胺和谷氨酰胺水解变为相应的天冬氨酸和谷氨酸; (4)天冬氨酸肽键发生水解. 因此在非水相酶反应体系中存在着最佳含水量,该最佳含水量不仅取决于酶的种类也与所选用的有机溶剂有关. 无水下酶空间构象被破坏,故需一层水化层; 必需水:维持酶分子完整空间构象所必需的最低水量; 不同的酶所需求的必需水的量差别较大; 每分子凝乳蛋白酶只需50分子的水，每分子多酚氧化酶却需3.5×102个水分子 原因:必需水是维持酶分子结构中氢键、盐键等副键所必需的。 典型的非水酶体系中水含量通常只占0.01%，但其微小差距会导致酶催化活力的较大改变。 水影响蛋白质结构的完整性、活性位点的极性和稳定性。 有机介质中含两类水：结合水、游离水； 在结合水不变的条件下，体系含水量的变化对酶催化活性影响不大； 然而在一些体系中，溶剂和底物性质对酶活力也有直接或间接影响； 为了排除溶剂对最适含水量的影响，Halling建议用水活度（aw）描述有机介质中酶催化活力与水的关系： 水活度：体系中水的逸度与纯水逸度之比； 用体系中水蒸汽压与相同条件下纯水蒸汽压之比表示； Aw=P/Po P：一定条件下体系中水的蒸汽压 Po:相同条件下纯水的蒸汽压 水活度与溶剂极性大小无关，最适含水量与溶剂极性成正比，故采用水活度作参数更确切； 3.水活度 有机溶剂主要通过以下三种途径发生作用: 一是有机溶剂与酶直接发生作用通过干扰氢键和疏水键等改变酶的构象从而导致酶的活性被抑制或酶的失活; 二是有机溶剂和能扩散的底物或反应产物相互作用影响正常反应的进行; 三是有机溶剂还可以直接和酶分子周围的水相互作用 三 有机溶剂对有机介质中酶催化的影响 在水溶液中酶分子均一地溶解在水溶液中，较好地保持其构象； 有机溶剂中酶分子不能直接溶解，因此根据酶分子特性与有机溶剂特性不同，其空间结构的保持也有不同。 有些酶在有机溶剂作用下，其结构受到破坏； 有的酶分子则保持完整； （1）有机溶剂对酶分子表面结构的影响：由于酶分子与溶剂的直接接触，酶分子表面结构发生变化； （2）有机溶剂对酶活性中心结合位点的影响：通过减少整个活性中心的数量，溶剂对酶的活性中心产生影响，活性中心数目丧失的多少取决于溶剂中的疏水性大小。 Why？溶剂与底物竞争酶的活性中心结合位点，溶剂为非极性，影响更明显，溶剂分子能渗透入酶的活性中心，降低活性中心的极性，增加酶与底物的静电斥