嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统GspF、E基因的序列测定及smp基因同源重组载体的构建.docVIP

青岛大学 硕士学位论文 嗜麦芽寡养单胞菌D2株Ⅱ型分泌系统GspF、E基因的序列测定及 smp基因同源重组载体的构建 姓名：辛晓妮 申请学位级别：硕士 专业：临床检验诊断学 指导教师：闫志勇  摘 目的本实验室在??年从海洋生物沙蚕消化道中分离出嗜麦芽寡养单胞菌?，该 ? 序列和生物信息学分析。???莼竦玫膕?基因的上、下游基因序列设计引物，并 ?甋?—???永┰鐾?幢跘、基因??屯?幢跙，得到三段的嵌合基因序列 重组自杀质粒?????—?猼??，并进行测序分析。 ??基因????收录号????．?  同源臂??斡朐?蛄兄挥?个碱基不同，保真性达?％。 结论检测出?株敏感性抗生素氯霉素??为? ? 硕士研究生 辛晓妮?俅布煅檎锒涎? 闫志勇副教授 目????????；青岛市自然科学基金???—??一??  ??? ????? ?? ?????? ????? ? ???? ????????? ????? ??????????????畐?? ?? ? ???．? ? ? ? ?? ? ?? ? ? ? ??? ?． ?????? ?????? ??? ? ?? ?? ??．?瓵???? ? ? ?? ??????．????? ? ?? ? ? ??? ? ? ? ? ? ? ?篈???? ? ? ??????? ? ??????? ?? ? ?? ? ? ? ? ? ??????琣????? ?? ?????． ? ? ???????’?? ? ? ????????????瑃? ? ?  ??? ?? ?????瓵???? ? ????瑃????? ? ? ? ?????? ?????? ? ????．? ? ? ? ? ? ?? ? ? ? ? ????? ? ???? ???? ????? ???? ?．???? ?? ????琣? ??? ?? ?瑃????? ? ????? ? ? ? ??????? ?? ???? ?? ?? ? ? ? ??? ? ? ??? ? ?? ? ??—???? ? ????? ? ?? ? ?????． ??????????? ? ????? ?????? ? ?  青岛大学硕士学位论文 列测定及??基因同源重组载体的构建 ??甿?????， 现象在其他野生菌株中较为少见，其机制值得深入研究。 和???辏?究翁庾榛嬷屏藄?爰?蚋浇??虻牟糠只?蚪峁共萃?图?，分析发  ???簆????璦???? 型分泌系统主要以分泌途径的转膜蛋白基因簇为中心，机制比较复杂，涉及到?一? 状与相对应基因的关系。  青岛大学硕士学位论文 泌机制提供了基本资料。 ??上、下游序列的分析 上游序列测定 ?┰龌竦孟掠蝜?┰龌竦蒙嫌蜪?竦肨??的 ??幢燮?蜝 ?!!R涣?用浮!!!!!#甁  嗜麦芽寡养单胞菌?株由本室闫志勇副教授等从海洋生物沙蚕的消化道分离鉴 质粒???、???购自大连宝生物工程有限公司。 ??主要试剂 限制性内切酶毖蒯，，??以级???高保真酶???? ?????、? 连接酶、?????分子量标准???、???⒌鞍追肿恿勘曜糓?????和 ??主要仪器 ??┰鲆?德国，???????； ????????超纯水净化系统?拦?； 紫外分光光度计????毡镜航?； ????型台式恒温振荡器??仗ú?； ????型电热恒温培养箱?虾Ｉ搅?笛樯璞赣邢薰??； ?????．? ? ???各型号移液器?ü?。  青岛大学硕士学位论文 ??培养基 ???平板：胰化蛋白胨?ァ⒔湍柑崛∥?．?ァ???％．琼脂粉??％，氨苄青素 ?????平板：胰化蛋白胨?ィ?湍柑崛∥?．?ィ琋??％、琼脂粉??％、??? ? ???蔗糖平板：胰化蛋白胨?ァ⒔湍柑崛∥?．?ァ⑶碇??．?ァ⒄崽?％，???。 ? ???。 ???莘肿涌寺〉谌?妫?杓埔韵?种抗生素的浓度，如表??。 ?殴芗尤胍欢?恐?媾ǘ瓤股?兀?直鹬瞥缮媳碇凶罡呖股?嘏ǘ?倍的? ??有孪蔐?桨迳先???蒙?硌嗡?瞥蒓．?笫吓ǘ染?海?直鹑??菌液  表??药敏试验的药物浓度 其?型分泌系统??和??基因序列分析 使用基因组??崛∈约梁???? ?????????拦鶳??? ? ??????鞍壮恋砑寥隕?苤校?咚傥行??，使混匀。 匀，至形成肉眼可见的白色团块。 ???心???????。弃去上清，放置滤纸上控干后，力??? ??力?????蘧??羲???嫠???匦氯芙釪?团块，定时多次敲打?管，加 快团块溶解。 ??溶解液琼脂糖电泳。将提取??湃??℃冻存以备用。  青岛大学硕士学位论文 表??扩增基因的引物序列 表?? ??? 使用???